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1.2 试药对照品
环丙沙星对照品(中国药品生物制品检定所，批号：130451-200302,含量：84.9%);阿昔洛韦对照品(中国药品生物制品检定所，批号：140630-200602, 供含量测定用);复方环昔滴眼液(医院自制，批号：080818、080921、081014);甲醇、乙腈、三乙胺均为色谱纯，其他试剂为分析纯;水为注射用水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：色谱柱：Kromasil C18 柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相：甲醇-乙腈-0.05 mol·L-1枸橼酸溶液(三乙胺调pH至3.5)，各组分比为15∶15∶70;检测波长：253 nm;流速：0.8 mL·min-1;柱温：室温;进样量：20 μL。在该色谱条件下，以图1 A-C计算，阿昔洛韦和盐酸环丙沙星的理论塔板数分别为3553和7241，两者分离度为13.6。
图1 高效液相色谱图(略)
A 阴性样品; B 对照品; C 样品1 阿昔洛韦 2 盐酸环丙沙星
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液:分别精密称取环丙沙星对照品35.6 mg和105 ℃干燥3 h后的阿昔洛韦对照品10.2 mg置同一100 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1盐酸溶液适量超声至溶解，加稀释溶剂甲醇-0.05 mol/L枸橼酸溶液(20∶80)至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液，其中环丙沙星和阿昔洛韦浓度分别为0.302 mg·mL-1和0.102 mg·mL-1。精密吸取混合对照品储备液5 mL置于25 mL量瓶中，加稀释溶剂至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液:精密吸取样品1.0 mL置50 mL量瓶中，加稀释溶剂至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性样品溶液:按处方比例制备不含盐酸环丙沙星和阿昔洛韦的阴性样品溶液，并按“2.2.2”项下方法操作，制成阴性样品溶液医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
2.3 标准曲线的制备
精密吸取“2.2.1”项下的混合对照品储备液0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0 mL分置10 mL量瓶中，加稀释溶剂稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品系列溶液。分别取上述溶液20 μL，依次注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品的浓度C(μg·mL-1)为横坐标，峰面积A为纵坐标，经线性回归，环丙沙星浓度在15.1～241.6 μg·mL-1范围内有良好的线性关系，回归方程为A=1.2048C+2.5342，(r=0.9993);阿昔洛韦浓度在5.1～81.6 μg·mL-1范围内有很好的线性关系，回归方程为A=2.0784C-0.2306(r=0.9998)。
2.4 干扰试验
取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液在上述色谱条件下各进样20 μL测定，记录色谱图，阴性样品对测定无干扰，见图1。
2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积，环丙沙星峰面积的RSD为0.63%，阿昔洛韦峰面积的RSD为0.41%(n=6)。
2.6 重复性试验
取样品(批号：081014)6份，按样品测定方法测定，测得环丙沙星和阿昔洛韦含量的RSD分别为0.78%和0.67%。
2.7 稳定性试验
取供试品溶液，分别于0,2,4,6,8 h进样20 μL后测定环丙沙星和阿昔洛韦的峰面积，RSD分别为0.68%和0.55%(n=6)。
2.8 加样回收率试验
