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1.2 方法
1.2.1 模型复制方法[1] 将 CCl4与橄榄油以4∶6(体积比)配成 40%油剂，首剂按0.5ml/100g体重腹腔注射，以后按 0.3ml/100 g体重腹腔注射，2次/周，第4周末，大鼠中期肝纤维化形成并开始治疗，治疗期间继续CCl4腹腔注射，以维持病因刺激至第12周末。
1.2.2 分组 造模过程共死亡8只大鼠，将余下的132只大鼠肝纤维化模型随机分为加味桃核承气汤低剂量组27只、加味桃核承气汤中剂量组27只、加味桃核承气汤高剂量组26只、秋水仙碱组26只、模型对照组26只;造模前设有正常对照组10只。共6组。
1.2.3 给药方法 于第4周末开始给药。加味桃核承气汤低、中、高剂量组分别按每100g体重 0.25ml、 0.5ml、1.0ml的剂量灌胃给药;秋水仙碱组按每kg体重0.1mg的剂量，秋水仙碱用生理盐水溶解后灌胃;模型对照组、正常对照组以同体积生理盐水灌胃。疗程均为每天1次，连用8周。
1.2.4 标本的提取方法 治疗8周后，股动脉取血作肝功能指标检测;取肝组织用10%福尔马林固定，用作组织病理学观察。
1.2.5 观察指标 (1)一般情况：观察大鼠精神、食欲、毛色、二便及舌质的变化，观察肝脏质地。(2)肝功能指标血清ALT、AST测定：日本岛津7200型全自动生化分析仪测定。(3)肝组织病理学观察：肝组织经石蜡包埋、切片，作HE染色、苦味酸-天狼红胶原染色，观察肝细胞变性、纤维组织增生情况。按2000年全国肝炎防治会议制定的标准(2000标准)观察肝纤维化变化情况[2]，再按肝纤维化组织半定量计分系统(SSS)计分[3]。(4)肝组织TGFβ1的蛋白表达，采用免疫组织化学染色法。肝组织经石蜡包埋、切片、二甲苯脱蜡、乙醇水化;PBS液洗5min，共3次;3%H2O2室温孵育30min;PBS液洗3次，5min/次;加抗TGFβ1抗体，湿盒内置37℃孵箱内2h;PBS液洗3次，5min/次;加二抗，37℃孵箱内置1h;PBS液洗3次，5min/次;DAB显色10min;流水终止反应3min;苏木素复染3min;流水洗1min;1%盐酸酒精分化;流水蓝化10min;梯度酒精脱水5min;中性树胶封片。检测TGFβ1蛋白表达的半定量方法：用彩色病理图文报告分析系统在低倍镜(100×)下计算每视野棕黄色阳性面积占视野总面积百分比(%)。
1.3 统计学方法 运用SPSS12.0统计软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 一般情况 模型对照组大鼠疲软、不喜活动、饮食减少、皮毛杂乱、便溏、明显消瘦、舌质紫暗、7只出现腹水;秋水仙碱组精神状态及活动情况一般，有2只大鼠出现腹水;高、中、低治疗组精神状态相对较好，皮毛有光泽，无腹水。肝脏质地：模型对照组肝脏颜色灰暗，质硬，肿胀，呈颗粒状;各治疗组情况较好，肝脏质地较软，边缘规则，颜色较前红润，无颗粒状改变医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
2.2 对肝纤维化大鼠ALT、AST的影响 见表1。
2.3 肝纤维化 模型对照组天狼红染色可见汇管区和小叶间有大量粗大增生的胶原纤维，大量胶原沉积，相互连接的纤维隔将肝小叶重新分割，形成结节样的假小叶;加味桃核承气汤高、中剂量组天狼红染色可见汇管区有很细很少的纤维隔，且尚未连接;秋水仙碱组有胶原沉积，小叶间有细纤维隔相连，但未见结节样的假小叶。加味桃核承气汤高、中剂量治疗组及秋水仙碱组的肝纤维化SSS计分较模型对照组减少，加味桃核承气汤高、中剂量治疗组SSS计分低于秋水仙碱组。见表1。表1 对肝纤维化大鼠肝功能及SSS计分结果的影响与正常对照组比较，#P<0.05，##P<0.01;与模型对照组比较，^P<0.05，^^P<0.01;与秋水仙碱组比较△P<0.05
2.4 肝组织TGFβ1的表达 在CCl4肝纤维化模型大鼠肝组织中TGFβ1表达广泛且特点相似，在纤维间隔、肝窦、纤维间隔周围的肝细胞、汇管区和中央静脉等均可见表达，显著高于正常对照组;加味桃核承气汤高、中、低剂量组及秋水仙碱组的TGFβ1的表达水平均低于模型对照组。见表2及图1～6。表2 加味桃核承气汤对肝纤维化大鼠TGFβ1表达的影响
3 讨论
