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1 材料与方法
1.1 细胞株及实验动物 人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3由复旦大学妇产科医院丰有吉教授惠赠。6周龄BALB/C雌性裸鼠12只由南通大学动物实验中心提供，动物实验在SPF级实验动物室进行。
1.2 实验药物及试剂 主要试剂：RPMI1640细胞培养基、胎牛血清购自Gibco公司，鼠抗人CD34单克隆抗体一抗，兔抗人单克隆抗体MMP2购自博士德公司，山羊抗兔生物素标记二抗购自DAKO公司，ABC免疫组化试剂盒购自华美生物工程有限公司。
1.3 裸鼠腹腔移植瘤模型的建立 SKOV3细胞悬液注射于12只裸鼠腹腔(每只3 ×106个细胞)，待裸鼠腹水显著、接近死亡时处死裸鼠，取出腹腔移植瘤组织及肿瘤周边组织。10%甲醛固定，石蜡包埋，5 μm连续切片。
1.4 CD34/PAS双重染色 所收集的组织标本制片后二甲苯脱蜡，酒精梯度脱水，3%H2O2去除内源性过氧化物酶活性，组织抗原微波修复，10%羊血清封闭1∶100鼠抗人CD34单克隆抗体一抗，室温孵育2小时生物素标记的羊抗鼠抗体，HRP标记的链霉卵白素，DAB反应,显微镜下观察到内皮细胞着色后, 终止显色反应，0.5%高碘酸溶液还原8~10 min，Schiff液染色10 min，蒸馏水返色, 苏木精对比染色，显微镜下观察。
1.5 免疫组化 石蜡标本二甲苯脱蜡，酒精梯度水化，3%H2O2去除内源性过氧化物酶活性，组织抗原微波修复，10%羊血清封闭1∶100鼠抗人MMP-2单克隆抗体一抗,室温孵育2 h，生物素标记的羊抗鼠抗体，室温30 min，HRP标记的链霉卵白素，DAB反应显色，苏木素复染，显微镜下观察。结果判定：以鼠的IgG代替一抗作为阴性对照。细胞核和(或)细胞浆呈淡黄色、黄色、棕黄色颗粒为阳性。两位病理科医师进行盲法读片，按Formwitz半定量积分法，随机选择5个高倍镜视野，每个视野计数阳性细胞数所占百分比：≤5%计0分;~25%计1分;~50%计2分;~75%计3分;>75%计4分。细胞染色强度：无色计0分;淡黄色计1分;黄色计2分;棕黄色计3分。两者相乘即是最后结果：0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为阳性(++);9～12分为强阳性(+++)。
2 结 果
2.1 裸鼠腹腔移植瘤镜下观察 处死荷瘤鼠, 腹腔内见1~2 ml血性腹水，肿瘤呈实性，弥漫性生长, 直径大小0.5~1.5 cm不等, 浸润肠肝脾等腹腔脏器医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
2.2 CD34/PAS双重染色 取卵巢癌腹腔移植瘤中央区域组织行CD34/PAS双重染色，结果显示部分肿瘤细胞灶性表达PAS阳性物质，部分PAS阳性物质将肿瘤细胞同管腔分隔，肿瘤细胞构成的管腔结构中没有CD34阳性的内皮细胞衬覆，管腔结构中可见红细胞。见图1。
2.3 MMP2在卵巢癌腹腔移植瘤中央区域和边缘区域组织的表达 MMP2阳性产物为棕黄色颗粒，主要分布于细胞浆中。裸鼠卵巢浆液性腺癌腹腔移植瘤中有MMP2表达。MMP2蛋白在裸鼠卵巢癌腹腔移殖瘤中央区域表达-~++ 3例，+++ 9例(75.0%);边缘区域表达-~++ 10例，+++ 2例(16.7%)，MMP2蛋白阳性表达率在肿瘤中央区域组织比肿瘤边缘区域明显增高(P<0.05 )，图2、3。
2.4 MMP2-mRNA在卵巢癌腹腔移植瘤中央和边缘区域组织的表达 RT-PCR分析显示卵巢癌腹腔移植瘤肿瘤细胞表达MMP2, 肿瘤组织中央区域MMP2表达相对值(0.764±0.026)与边缘区域(0.483±0.039)相比，差异有统计学意义(P<0.05)，见图4。
3 讨 论
少数高度恶性肿瘤在没有血管内皮细胞的参与下，肿瘤细胞表型出现转化，通过自身变形直接形成特有的微循环管道，被称为血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)。这种拟态血管的管壁结构与血管生成不一样，无血管内皮细胞衬覆。VM是近年来发现的存在于部分高度恶性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、肝癌、恶性黑色素瘤、卵巢癌等内的一种新的肿瘤血液供应方式。高度恶性的肿瘤细胞在快速生长期间，通过肿瘤血管生成所形成的内皮依赖性血管无法满足其血液供应的需要时，肿瘤细胞可以通过血管生成拟态这种微循环管道来获取营养，使得肿瘤具有高度侵袭性。
美国Iowa大学的Maniotis等研究高侵袭性葡萄膜黑色素瘤时发现：直径>1 cm的肿块很少坏死，但是普通病理切片上难以见到由血管内皮细胞构成的新生血管;PAS染色可见多种阳性管道结构，无内皮细胞衬覆，肿瘤细胞模仿机体血管形成脉管，和原有静脉连接，有的管道可见红细胞。孙保存[4]等通过CD31和PAS双重染色来观察黑色素瘤内血管生成拟态的形态学特征，发现CD31染色阴性的肿瘤细胞可围成管腔，内衬樱桃红色的PAS阳性物质,管腔内有成堆的红细胞;也有些血管生成拟态中肿瘤细胞围成的不规则管腔内无PAS阳性物质衬复,管腔内存在红细胞，但部分黑色素瘤细胞能够表达PAS阳性物质。
