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1 材料与方法
1.1 资料来源
收集1996年1月至2004年6月西安交通大学医学院第一附属医院妇产科术前均未经放、化疗或激素治疗的子宫内膜腺癌患者的石蜡包埋标本42例，不典型增生子宫内膜患者石蜡包埋标本12例和正常子宫内膜包埋标本12例(增生期5例，分泌期4例，萎缩性子宫内膜3例)。以上标本均行常规病理学检查及HE染色确诊，实验过程中经病理医师复诊。子宫内膜腺癌临床分期参照国际妇产科联盟(FIGO，1988)，组织学分级参照国际妇产科联盟(FIGO，1988)。42例子宫内膜腺癌组织标本中，临床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期12例，Ⅲ期11例，Ⅳ期1例;组织学分级Ⅰ级(高分化腺癌)12例，Ⅱ级(中分化腺癌)15例，Ⅲ级(低分化腺癌)15例;子宫内膜腺癌均无宫体外转移，限于内膜层，无肌层浸润10例，浅肌层浸润(≤1/2肌层)18例，深肌层浸润(>1/2肌层)14例(分别见表2、表3、表4);子宫内膜腺癌患者年龄38～76岁，平均(58±6.1)岁。不典型增生子宫内膜患者年龄44～67岁，平均(56±5.3)岁。正常子宫内膜患者35～50岁，平均(42±4.2)岁。上述标本均经100g/L甲醛固定，常规石蜡包埋，5μm连续切片，分别做HE和EliVisionTM plus免疫组织化学染色。
1.2 实验试剂
第一抗体试剂：①鼠抗人MMP-3单克隆抗体浓缩型，0.1mL，工作浓度1∶50，购于武汉博士德生物工程有限公司;②鼠抗人MMP-10单克隆抗体浓缩型，0.1mL，工作浓度1∶50，购于武汉博士德生物工程有限公司。第二抗体试剂：EliVisionTM plus鼠免疫组化试剂盒，购于福州迈新生物工程有限公司。显色剂：DAB显色剂，购于福州迈新生物工程有限公司医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
1.3 实验方法
采用EliVisionTM plus 二步法免疫组化染色检测MMP-3、MMP-10在子宫内膜癌组织中的表达。阳性对照：用武汉博士德生物有限公司提供的MMP-3、 MMP-10阳性对照片作为阳性对照;阴性对照：用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判定
光学显微镜下，见肿瘤细胞质中出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞。MMP-3、MMP-10表达阳性和阴性，根据细胞染色强度和染色细胞所占比例两者积分之和来判断。评分方法：观察每例组织切片，随机选择5个高倍视野(10×40)，计数肿瘤细胞总数和阳性细胞个数，得出阳性细胞百分率。着色强度为多数阳性细胞呈现的染色计分。染色强度积分为：不染色=0，淡黄色=1，黄色=2，桔黄色=3，棕黄色=4;0～5%细胞染色=0，6%～50%细胞染色=1，>50%细胞染色=2。综合评分：0～3分为阴性，4～6分为阳性。
1.5 统计学分析
采用χ2检验，校正χ2检验，确切概率法，3者之间比较采用Kruskal-wallis法检验，3组之间两两比较采用Bonfferoni法检验，以P<0.05为有统计学意义。
2 结 果
2.1 MMP-3、MMP-10在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中的表达
MMP-3从正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜至子宫内膜腺癌组织中的表达呈现逐渐升高趋势。正常子宫内膜组与不典型增生子宫内膜组之间比较，无统计学差异(P>0.05);正常子宫内膜组与子宫内膜腺癌组之间比较，具有统计学差异(P=0.000);不典型增生子宫内膜组与子宫内膜腺癌组之间比较，具有统计学差异(P=0.002，表1)。
MMP-10从正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜至子宫内膜腺癌组织中的表达呈现逐渐升高趋势。正常子宫内膜组与不典型增生子宫内膜组之间比较，无统计学差异(P>0.05);正常子宫内膜组与子宫内膜腺癌组之间比较，具有统计学差异(P<0.01);不典型增生子宫内膜组与子宫内膜腺癌组之间比较，具有统计学差异(P<0.01，表1)表1 正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜腺癌组织中MMP-3、MMP-10表达的比较(略)。
MMP-3在正常子宫内膜及不典型增生子宫内膜组织中仅表现为胞质内浅黄色淡染，而在子宫内膜腺癌组织中大部分细胞质呈强染色，呈深棕黄色(图1)。MMP-10阳性表达主要定位在细胞质，呈棕黄色颗粒状。在正常子宫内膜细胞大部分无着色或呈现细小均匀的淡黄色;在不典型增生子宫内膜中阳性着色强度不一，多为淡黄色;而在子宫内膜腺癌中的细胞胞质内多为阳性或强阳性着色，着色均匀或黄色颗粒布满细胞质(图1)。
2.2 MMP-3、MMP-10与子宫内膜腺癌组织学分级的关系
3组之间比较，采用Kruskal-walli法检验，显示MMP-3、MMP-10表达与子宫内膜腺癌组织学分级有关，随着肿瘤细胞分级升高，MMP-3、MMP-10表达有逐步升高趋势(P<0.01，表2)。表2 MMP-3、MMP-10在子宫内膜腺癌不同组织学分级中的表达(略)
2.3 MMP-3、MMP-10与子宫内膜腺癌浸润程度之间的关系
3组之间比较，采用Kruskal-walli法检验，显示MMP-3、MMP-10表达与子宫内膜浸润程度有关，随着肿瘤细胞浸润程度加深，MMP-3、MMP-10表达有升高趋势(P<0.01，表3)。表3 MMP-3、MMP-10与子宫内膜腺癌不同肌层浸润程度中的表达(略)
2.4 MMP-3、MMP-10与子宫内膜腺癌临床分期之间的关系
3组之间比较，采用Kruskal-walli法检验，显示MMP-3、MMP-10表达与子宫内膜腺癌临床分期有关，随着临床分期增加，MMP-3、MMP-10的表达有逐步升高趋势(P<0.01，表4)。表4 MMP-3、MMP-10在子宫内膜腺癌不同临床分期中的表达(略医.学全.在.线网站www.lindalemus.com)
2.5 子宫内膜腺癌中MMP-3与MMP-10的相关性
结果显示：MMP-3与MMP-10在子宫内膜腺癌的检测中具有明显的相关性(表5)。表5 MMP-3与MMP-10的相关性(略)
2.6 联合检测MMP-3与MMP-10的阳性表达率
联合检测MMP-3与MMP-10，在子宫内膜腺癌中总阳性表达率为88.1%(35/42)，明显高于MMP-3单独在子宫内膜腺癌中的阳性表达率(P<0.05)，但与MMP-10在子宫内膜腺癌中的阳性表达率无明显差异(P>0.05，表6)。 表6 MMP-3和MMP-10联合阳性表达率与单独MMP-3、MMP-10的阳性表达率的比较(略)
3 讨 论
侵袭与转移是恶性肿瘤的主要生物学特征，ECM的降解主要依靠蛋白水解酶，是肿瘤侵袭正常组织和开始转移的信号及重要途径。MMPs是一类重要的细胞外基质降解酶[2]，几乎能降解ECM的所有成分。
