 |
 |
2.4 抑制剂对肝匀浆中HL活性的影响
配制上述优化pH值9.5的TrisHC1系统，加入50 μL肝匀浆及相同量的相关的试剂，并加入盐酸氯丙嗪至终浓度1、5、25 μmol/L，或加入SDS至终浓度0.01、0.1、1.0 mol/L，37 ℃、温育反应30 min,按上述方法操作检测体系中HL活性，确定氯丙嗪、SDS对匀浆中HL活性的影响医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
2.5 FTZ不同调脂组分对大鼠肝HL的影响
在上述优化pH值9.5的TrisHC1的反应系统中，加入50 μL肝匀浆量和相同量的相关试剂并加FTZ的不同活性成分至不同浓度(0.1、0.50、2.50 μg/mL)于37 ℃、温育反应30 min,按上述方法操作，测定FTZ不同组分各种浓度时肝匀浆中HL酶的活性，确定对匀浆中HL活性的影响。
2.6 统计学分析
以SPSS16.0 软件进行统计学处理,所有结果用以均数±标准差(±s)表示,各均数间用t检验，P<0.05为差异有显著性。
3 结 果
3.1 HL活性测定的酶量曲线
以肝组织匀浆上清作为标本,测定不同匀浆蛋白量时HL酶活性，结果如图1。由图1 可见,匀浆量在0～50 μL 之间，HL酶活性随着匀浆蛋白量的增加而递增，匀浆蛋白量与酶活性之间呈一直线关系(r=0.998 8)。
3.2 pH值对肝匀浆中肝脂酶活性的影响
TrisCl反应体系的pH不同，测得50 μL 肝匀浆的HL活性明显不同,说明pH对肝匀浆的HL活性有明显的影响(见表1)，其最适反应体系pH是9.5，此时酶比活性最大。表1 不同反应体系pH值对大鼠肝HL活性的影响
3.3 肝脂肪酶活性与反应时间曲线
在0～90 min内，酶活性随温育时间延长而增加，温育90 min HL活性达最大值4.98 U，温育30 min HL活性达最大值的91.5%(4.61 U)，但超过90 min，HL活性反而显下降趋势(见图2)。为方便试验，选择30 min作为其他实验温育时间。
3.4 温度对大鼠匀浆HL活性的影响
肝匀浆中HL活性在25 ℃，保存24 h，酶活性下降80%，4 ℃保存24 h酶活性下降35%，在-20 ℃保存24 h，酶活性下降5%，在-70 ℃，保存24 h，酶活性下降3%。说明肝匀浆中HL活性在室温下不稳定，在4 ℃也不够稳定。在-20 ℃和-70 ℃下保存HL酶活性较稳定。
大鼠肝匀浆制备后，立即加入DTT至终浓度为1 mmol/L的肝匀浆中HL酶活性在25 ℃，保存24 h，HL酶活性只下降40%，说明DTT对肝匀浆中HL酶活性有保护作用。加入DTT至1 mmol/L的肝匀浆在-70 ℃下保存1个月，仍有很高HL酶活性，相当于刚制备的肝匀浆HL酶活性的95%(见表2)。说明肝匀浆加入DTT在-70 ℃低温冷冻条件下可较长时间保存而维持其HL酶活性相对稳定。表2 不同保存条件下大鼠肝匀浆HL活性变化
3.5 钙浓度对大鼠匀浆肝HL酶活性的影响
在钙浓度为0.001、0.005、0.025、0.10 mol/L的反应体系中,大鼠肝匀浆中HL酶活性分别比无钙反应体系增加3～9倍,钙浓度为0.005 mol/L时HL酶活性增加最大达9倍(见表3)，表明体系中游离钙浓度(Ca2+)对大鼠肝匀浆中HL活性有激活作用。表3 钙浓度对大鼠肝HL活性的影响
3.6 抑制剂对大鼠肝HL的影响
在最适pH9.5的TrisCl反应体系中，加入氯丙嗪至终浓度分别为1、5、25 μmol/L，HL酶活性分别下降35%、56.7%、75.1%。
在最适pH9.5的TrisCl反应体系中加入SDS至终浓度分别为0.01、 0.1、1.0 mol/L，HL酶活性分别下降36.2%、64.8%、94.0%医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
3.7 FTZ 不同组分对大鼠肝匀浆HL活性的影响
0.1～2.5 μg/mL 的FTZ提取物及其活性成分齐墩果酸、三七总皂苷、人参皂苷Rb2能浓度依赖性增强HL活性，增加幅度可达75%，而高浓度盐酸小檗碱则可抑制HL活性，抑制率可达40%;丹参素对HL活性影响不明显(见图3)。
4 讨 论
肝脂酶(HL)是一种由肝脏实质细胞合成和分泌的糖蛋白,主要转运到肝窦状隙内皮细胞表面而发挥生理作用，并在肝中降解 [1，2]。 HL主要生理功能是水解各种脂蛋白中的三酰甘油和磷脂,在乳糜微粒残骸的清除、低密度脂蛋白的形成和胆固醇的逆向转运中起关键作用[1，2]。HL酶活性降低可引起血脂水平(主要为三酰甘油)升高、HDLC降低，进而影响到动脉粥样硬化的发生和发展[1-3] ;HL活性的降低还与脂肪肝形成有关[4，5]。维持HL酶活性对调节血脂、防治抗动脉粥样硬化和脂肪肝有重要意义。
