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2.1 MTT实验
体外培养小鼠H22肝细胞癌株进行MTT实验，根据如下公式计算各组抑制率：抑制率(%)=[1-(实验组A均数)/(对照组A均数)]×100%。
如图1所示，5Fu作为代表性的常用化疗药物对于体外培养的H22小鼠肝癌细胞具有显著的杀伤效果，细胞增殖抑制率为52.8%，与3种免疫抑制剂相比有显著性差异(P<0.05)。免疫抑制剂CsA和FK506对于H22小鼠肝癌细胞没有显著的抑制增殖的作用，而不同浓度的RPM有一定的抑制H22小鼠肝癌细胞增殖的作用。中、高浓度的RPM对H22小鼠肝癌细胞增殖的抑制率与CsA和FK506相比差异具有显著性(P<0.05)。RPM中、高浓度(0.1 mg/L、1mg/L)组与低浓度(0.01mg/L)组相比抑制H22小鼠肝癌细胞增殖率差异有显著性(P<0.05)，而中、高浓度组间相比无显著性差异医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
2.2 细胞周期分析
体外培养对数生长的H22小鼠肝癌细胞株，在不同的免疫制剂和5Fu分别作用48h后，应用流式细胞仪测定各组细胞的细胞周期分布变化，显示不同浓度的RPM、CsA、FK506对于H22小鼠肝癌细胞周期的影响不同。采用流式细胞仪测定的各组细胞细胞周期变化见表1。表1 不同免疫抑制剂对H22小鼠肝癌细胞周期的影响(略)
RPM对H22小鼠肝癌细胞周期的影响表现为G0/G1期细胞数增多而S期细胞数减少。应用不同浓度的RPM后H22小鼠肝癌细胞G0/G1期细胞数由25.38%增加到30.89%～34.00%，而S期细胞数由42.00% 降至37.13%～32.20%，结果与对照组相比均具有显著性差异(P<0.05)。RPM中、高浓度组与低浓度组相比对细胞周期的影响更显著，结果具有统计学意义(P<0.05);而中、高浓度组间相比没有显著性差异。CsA和FK506作用下的H22小鼠肝癌细胞G0/G1期细胞数减少，S期细胞数无明显变化。不同浓度RPM对于H22细胞周期的影响与CsA和FK506相比具有统计学意义(P<0.05)。中、高浓度的RPM与5Fu对H22小鼠肝癌细胞周期的影响作用类似。
2.3 皮片存活情况
实验中小鼠C57BL/6→BALB/c异体皮肤移植模型建立成功，不同组间皮肤移植物存活时间表现出较大的差异性。根据移植皮片排斥时间的确定标准，统计分析各组皮片平均存活时间。当受者小鼠给予不同剂量的RPM[1.5mg/(kg·d)，4.5mg/(kg·d)]、CsA[20mg/(kg·d)]、FK506[5mg/(kg·d)]灌胃后，移植物存活明显延长，平均存活17.7～18.5d，与对照组(6.1～8.7d)比较差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 肿瘤体积
对照组小鼠在接种H22小鼠肝癌细胞后一般在第5～7天在种植部位可以触摸到一小米粒大小的瘤块，第14天左右瘤块一般即非常明显。肿瘤种植到小鼠腹股沟皮下后第24天剖杀小鼠测定到的肿瘤体积，经ANOVA方差分析各组数据方差齐并且组间有差异(P<0.05)。由图2可见，各实验组间两两比较结果显示实验剂量的CsA和FK506促进了小鼠皮下移植瘤的生长，其肿瘤体积明显较对照组增大(P<0.05)。而实验剂量的RPM在相同的条件下抑制了肿瘤的生长，瘤组织的体积较对照组小(P<0.05)。联合应用RPM和CsA或者FK506时，比单用CsA或者FK506时肿瘤体积明显缩小，差异具有显著性(P<0.05)。表2 不同免疫抑制剂对H22肝癌细胞培养液上清中VEGF浓度的影响(略)
2.5 ELISA法测定VEGF含量
依据试剂盒提供的标准品测定的结果绘制工作标准曲线，用SSPS软件进行直线回归分析，建立回归方程：VEGF浓度=-28.598+(A值×196.746)。根据公式计算出各实验组的H22小鼠肝癌细胞培养上清液中VEGF浓度(表2)。在各组细胞培养上清液中，VEGF含量有差异，不同浓度的RPM作用下上清液中VEGF浓度显著减低(P<0.05)。0.1mg/L FK506作用下上清液中VEGF浓度显著减低(P<0.05)。1mg/L CsA作用下VEGF浓度略有提高。
体内实验的各组实验小鼠中，1.5mg/(kg·d)和4.5mg/(kg·d)的实验剂量RPM可降低荷瘤小鼠血清中的VEGF浓度(P<0.05)。5Fu治疗组血清中的VEGF浓度也显著降低，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。服用CsA的小鼠血清中的VEGF浓度较对照组升高(P<0.05)。FK506组VEGF浓度与对照组比较没有明显差异(表3)。表3 荷瘤小鼠血清中VEGF浓度的测定结果(略)
2.6 肿瘤组织内MVD的测定
