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各组小鼠皮下移植瘤瘤块中均可见到CD34阳性染色，肿瘤组织内的血管内皮CD34呈强免疫反应。根据实验原则计算标本的微血管密度(MVD)(表4)。应用实验剂量的RPM可以显著地减少瘤组织内的微血管密度，结果具有统计学意义(P<0.05)。其余各组MVD值与对照组相比没有显著差异。表4 小鼠瘤组织内MVD的测定结果(略)
3 讨 论
肝胆恶性肿瘤患者移植术后2年内肝癌复发率高于60%[1]，免疫抑制剂的使用可加速肿瘤生长[2]。术后肿瘤复发成为阻碍肝癌肝移植临床广泛开展的最主要问题之一。由于作用机理、作用环节不同，不同的免疫抑制剂的免疫抑制作用与效果也不同。应用大剂量糖皮质激素作为免疫抑制剂时，肝癌肝移植术后肝癌复发率显著增高[3]。选用新的免疫抑制剂有可能降低肝移植术后肝癌的复发率医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
RPM是链霉菌属丝状菌发酵产生的一种具有抗真菌作用的大环内酯类抗生素。1999年，美国FDA批准RPM应用于临床器官移植。RPM发挥免疫抑制作用的机制包括[45]：①通过抑制真核生物启动因子4E结合蛋白1(4EBPl)的磷酸化，阻止eIF4E的释放和转录;②抑制P27介导的cdk2细胞周期素的激活和DNA的合成;③抑制P70S6激酶活化，阻遏核糖体蛋白S6磷酸化，减少核糖体/转录蛋白的合成，最终抑制T细胞Gl后期向S期过渡。
本研究中，RPM具有同CsA、FK506同效的免疫抑制作用，均显著延长了皮肤移植物生存时间。但是，仅RPM显著抑制H22肝细胞癌株的生长增殖。
RPM对于细胞周期的影响是其成为免疫抑制剂的基础之一，也是其具有抗肿瘤特性的主要因素。在本实验中，我们观察到剂量为0.01、0.1、1mg/L的RPM与对数生长的H22肝细胞癌株分别共同培养48h后，表现出一定的细胞毒性作用。同时进入实验的剂量为1mg/L的CsA和0.1mg/L的FK506对于H22肝细胞癌细胞没有明显的抑制作用。在细胞周期分析中可见到在不同浓度的RPM作用下，对H22小鼠肝癌细胞周期的影响表现为G0/G1期细胞数增多而S期细胞数减少。1mg/L的CsA和0.1mg/L的FK506与H22肝细胞癌细胞共同培养，没有增加其细胞周期G0/G1期细胞数。提示RPM具有将H22细胞生长阻滞在G0/G1期的效果。这与国外学者SCHUMACHER[6]对于人肝癌细胞株体外培养的研究结果基本一致。
RPM抑制肿瘤增殖的作用还被发现与其能够抑制血管内皮细胞生长因子(VEGF)有关。本研究发现剂量为0.01、0.1、1mg/L的RPM与H22小鼠肝细胞癌细胞株共同培养48h后，培养液上清中VEGF浓度显著减低(P<0.05)，提示不同剂量的RPM均具有显著抑制H22小鼠肝细胞癌细胞生成VEGF的能力。在体内实验中实验剂量的RPM可降低荷瘤小鼠血清中的VEGF浓度，有效抑制了瘤组织内肿瘤血管形成，使微血管密度(MVD)由52.60降至23.77～26.90，在此基础上RPM显著抑制了H22细胞增殖，使瘤体积较对照组缩小。证实RPM抑制肿瘤生长与抑制肿瘤新生血管形成密切相关，这与GUBA等[7]在结肠腺癌细胞形成肝脏转移瘤模型上的实验结论类似。上海中山医院关于人肝癌细胞株的研究也证实这一结果[8]。
本研究中，临床常用的免疫抑制剂CsA、FK506都表现出显著促进H22皮下移植瘤增殖的现象，而RPM作为一个高效的免疫抑制剂的同时具有与经典化疗药物5FU效果类似的抗肿瘤增殖特性。上海中山医院的临床肝移植经验初步提示，RPM可以改善超过米兰标准的肝癌肝移植预后[9]。因此，RPM替代CsA可能会减少癌症在高危移植病人中的发生或再发[911]。相信在未来RPM将在肝脏移植术后免疫抑制治疗中占据应有的地位。特别是体外实验研究和动物实验证实，RPM具有抗肿瘤增殖的特点，它将会在肝移植治疗肝脏恶性肿瘤方面发挥其优势。
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