1.2 方法
1.2.1 免疫组化SP法 石蜡标本做4?μm厚切片,常规脱蜡脱水,3%H2O2室温下孵育15?min以封闭内源性过氧化物酶,PBS冲洗每次5?min,洗3次。将切片置于枸橼酸缓冲液(pH6.0)中,高压锅内煮沸2?min?修复抗原,冷却至室温,PBS冲洗每次5?min,洗3次。滴加一抗,4?℃过夜,PBS冲洗每次5?min,洗3次,滴加生物素化的二抗工作液,37?℃下孵育30?min,PBS冲洗每次5?min,冲洗3次,滴加链酶亲和素过氧化物酶复合体(三抗),37?℃下孵育30?min,蒸馏水冲洗每次5?min,洗3次。DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片,PBS代替一抗做阴性对照。
1.2.2 结果判断标准 结果判定采用半定量积分法[1],染色高于背景非特异染色为阳性。根据每张切片的阳性细胞比例及着色深浅积分,着色细胞比例1/3为1分,1/3~2/3为2分,2/3以上为3分。着色程度,无着色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。然后根据二者乘积判定阳性等级,0分为(-),1~2分为(+),3~4分为(++),4分以上为(+++)。其中(++)~(+++)为阳性组,(-)~(+)为阴性组医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
1.3 统计学处理 所有数据统计分析均使用统计软件包SPSS13.0处理,组间阳性率的比较采用χ2检验或Fisher精确概率法检验; P<0.05为有统计学意义。
2 结 果
Galectin3表达定位于胞浆及胞核,以胞浆为主,未见单独的胞核染色。
2.1 肺原发性腺癌Galectin3表达与临床病理学参数的关系 见表1。绝大多数肺原发性腺癌中Galectin3?呈高表达,见图1。32例胞浆表达阳性(92.1%),其中12例胞核表达阳性(31.7%)。伴淋巴结转移者Galectin3核阳性率为48.5%高于无淋巴结转移者13.3%(P=0.03),在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期标本中Galectin3的核阳性率分别为3.8%、44.0%、66.7%(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ期标本核阳性率与Ⅰ期相比差异有统计学意义(P均<0.05),但Ⅱ、Ⅲ期核阳性率相比差异无统计学意义(P=0.197)。nGalectin3(胞浆,n)-+P值-+P值35332 ≤60282261.00012200.62829029 女345290.09223110.911淋巴转移33231 无303270.91216260.0301411310 中322300.788230.620 高1721510临床分期 Ⅰ2632225 Ⅱ252220.4601411<0.05 Ⅲ12012肺原发性腺癌Galectin3胞浆、胞核均呈阳性表达(SP法,×200)
Fig.1 Primary lung adenocarcinoma showed a diffuse and strong cytoplasmic and a nuclear staining of galectin3 (SP,×200)
2.2 Galectin3在胸膜转移性腺癌中的表达情况 见表2。Galectin3呈弥漫性、棕黄色或棕褐色表达,见图2。33例胞浆阳性(97.1%),其中29例胞核表达阳性(85.3%)。无淋巴结转移或伴有淋巴结转移的胸膜转移性腺癌中Galectin3在胞核、胞浆中表达差异均无统计学意义(P值分别为0.059、0.382)。
2.3 胸膜转移性腺癌与肺原发性腺癌Galectin3表达胞浆阳性率无明显差异(P=0.594),但是,核表达阳?性率差异有统计学意义(P<0.05),见表3。
3 讨 论