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3 讨论
本实验结果显示，冻融新生小鼠卵巢异体移植能存活，且原始卵泡能生长发育至各级卵泡。 PCNA 又称周期素，与细胞增殖和DNA合成有关。本实验PCNA阳性表达与Oktay等[4]研究结果相一致，见于初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡的颗粒细胞及初级卵泡的卵母细胞，原始卵泡未见PCNA的表达。两组移植后14 d的卵巢组织PCNA的阳性表达均较高，说明移植的卵巢组织均处于良好的生长发育状态，但移植后14 d回收的两组移植卵巢总卵泡数明显少于移植后14 d新鲜小鼠卵巢的总卵泡数，进一步证实了卵巢组织移植过程中由于无直接血管吻合导致的缺血低氧会损失很大一部分的卵泡[4-5]。本实验中我们把冻融小鼠卵巢移植至受体小鼠具有丰富血管的肾被膜下，但移植卵巢需要在其周围重新形成血管网才能恢复血供，在移植后至血管形成期间卵巢组织由于缺血低氧将导致卵泡的大量丢失，其机制可能与活性氧ROS的释放有关[3]。许多领域的研究已经证实ROS清除剂（如SOD、抗氧化剂维生素C、维生素E等)可以抑制ROS介导的细胞凋亡。丹参中所含主要活性成分丹参酚等酚类，具有很强的抗氧化活性，可作为天然的抗氧化剂，因此我们将其应用于实验中。本实验的结果显示丹参组移植后14 d回收卵巢总卵泡数多于对照组，各级卵泡数也存在明显差异，且丹参组的卵泡存活率达64.1%，显著高于对照组的卵泡存活率的44.7%，说明丹参能减轻冻融卵巢移植后的缺血低氧损伤，提高卵泡存活率。
SOD是一类金属酶，广泛存在于不需氧的生物组织中， 它能催化超氧自由基发生歧化反应，生成过氧化氢和氧，保护细胞免受损伤。SOD活力的高低间接反映了机体消除氧自由基的能力。丹参是一种强抗氧化剂，它的保护作用可能是抑制自由基介导的细胞损害作用，保护细胞膜结构和功能的完整性。王宇等[6]在大鼠肝的冷冻灌注保存液中加入丹参注射液，然后进行大鼠原位肝移植，发现丹参组肝组织中的SOD活性明显升高，肝组织缺血再灌注程度减轻。本实验结果亦显示丹参组各时间段移植卵巢组织中的SOD mRNA的表达均显著高于对照组，说明了丹参注射液可能通过增高移植卵巢组织中SOD活性，清除氧自由基，对防治冻融卵巢移植后的缺血低氧损伤起到积极的作用。
NO和NOS与缺血再灌注损伤的关系密切。NO是一种半衰期很短的自由基气体，低浓度的NO对组织具有保护作用，而高浓度状态下对组织有损害作用。NO是由NOS催化生成的，NOS分为三型：nNOS（神经型)、eNOS（内皮型)和iNOS（诱导型)，前两者的激活均依赖于钙离子和钙调蛋白的作用；iNOS在基态下不表达，可由炎症因子、内毒素等诱导激活，作用时间长，可催化生成大量NO[7]。Matsumi等发现，大多数不成熟的大鼠卵泡颗粒细胞中存在iNOS。聂莹雪等[8]实验结果显示，iNOS在缺血l2 h时开始增加， 随着缺血时间的延长其表达也逐渐增加。张莹等[9]将丹参注射液注射至重症胰腺炎大鼠模型体内来观察iNOS基因的表达，结果发现丹参早期治疗能抑制iNOS表达从而起到保护胰腺的作用。本实验中也发现在卵巢移植后的各时间段均有iNOS mRNA的表达，在对照组中，第1天 iNOS开始升高，第2天达到最高值，第14天有所下降，说明iNOS参与了卵巢移植后缺血损伤的过程。与对照组相比，丹参组的iNOS表达降低，两组差异存在显著性，提示丹参注射液可能通过下调iNOS mRNA的表达从而抑制NO的过度产生，对卵巢移植后的缺血-再灌注损伤起保护作用。
综上所述，冻融新生小鼠卵巢同种异体移植原始卵泡能存活并生长发育至各级卵泡，但移植早期的缺血低氧造成大量卵泡的丢失。丹参可能通过上调SOD mRNA的表达，清除氧自由基，下调iNOS mRNA的表达，抑制NO过度产生而对卵巢移植后的缺血低氧损伤起保护作用，从而提高卵巢移植后的卵泡存活率。
【参考文献】
[1] Byrne J, Fears TR, Gail MH, et al. Early menopause in long- term survivors of cancer during adolescence[J]. Am J ObstetGynecol,1992,166(3):788-793.
