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1 材料和方法
1.1 试剂 卵白蛋白（OVA)Ⅴ级和Histopaque分离液（Histopaque 1119和Histopaque 1083)购自美国sigma公司；山羊抗大鼠MMP-9一抗试剂盒购自美国Santa Cruz公司，兔抗羊二抗试剂盒和TIMP-1 ELISA试剂盒购自上海晶美公司。布地奈德由阿斯利康公司生产。
1.2 实验动物及分组 SPF级健康雄性SD大鼠30只，平均体重（234±19)g，由温州医学院实验动物中心提供[动物批号：SCXK（浙)2005-0019]，SPF级环境中饲养。随机分成3组，每组10只，分为哮喘组（A组)、布地奈德治疗组（B组)和正常对照组（C组)。
1.3 动物模型的复制[3] 方法为：第1天和第8天腹腔注射OVA/Al(OH)3混合液1 mL[含OVA 1 mg和Al(OH)3 100 mg]致敏，各1次。第15天开始每天向大鼠喷雾1% OVA 30 min，连续激发7 d。大鼠表现为烦躁不安、瘙痒、喘鸣、腹肌抽搐等症状。C组致敏和激发均以生理盐水替代OVA和Al(OH)3。B组处理基本同A组，不同的是在抗原首次激发前24 h和每次激发前1 h给予雾化吸入布地奈德2 mg/组。
1.4 血PMN的分离纯化[4] 末次激发24 h后，1%戊巴比妥30 mg/kg腹腔注射麻醉，心脏抽血4 mL，抗凝后加至备有Percoll分离液（Histopaque 1119和Histopaque 1083各4 mL)的离心管中，离心（700 r/min，4 ℃)30 min，取PMN富集层，低渗法溶解红细胞，台盼蓝染色查细胞活力>86%，瑞氏染色显示PMN纯度>89%。另抽血1 mL静置后取血清，ELISA法检测TIMP-1蛋白的浓度。
1.5 肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF)的制备灌洗前先结扎左肺门，取左肺组织，经常规固定、石蜡包埋、切片，HE染色400倍光镜下观察肺组织的病理改变和炎性细胞浸润情况，免疫组织化学法测定MMP-9的表达。BALF的留取操作如下：气管插管，支气管肺泡灌洗3次（每次5 mL生理盐水)，回收BALF，离心(4 ℃，3 000 r/min)10 min，沉渣经PBS重悬后行细胞总数计数和分类计数医.学全.在.线www.lindalemus.com。
1.6 免疫细胞化学法 采用SP法，操作按说明书进行。主要包括抗原修复，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶，兔血清封闭液，滴加一抗、二抗及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物，DAB显色、复染、封固，PBS代替一抗进行阴性对照。每张细胞涂片随机计数50个阳性细胞，Image-pro Plus 5.1免疫组化图像分析系统对阳性细胞进行灰度扫描，取其平均值代表该片的光密度（OD)值。
1.7 统计学处理方法 采用单因素方差分析法的LSD法分析。两变量的相关分析采用直性相关分析法分析。
2 结果
2.1 肺组织病理改变 大鼠肺组织切片HE染色显示：C组细支气管形态规则、偶见炎性细胞浸润，管腔内见较少分泌物，上皮完整，肺泡形态规则；A组可见细支气管形态不规则，见较多的炎性细胞浸润，管壁增厚，黏液栓形成，杯状细胞增生，部分支气管上皮细胞排列不完整、可见炎性细胞嗜上皮现象。B组细支气管的炎症改变较A组显著减轻。
2.2 BALF中白细胞计数 A组BALF中细胞总数及淋巴细胞（LYM)、PMN和嗜酸细胞（EOS)的百分比均显著高于C组（均P <0.01)，巨噬细胞（MФ)的百分比显著低于C组（P <0.01)。与C组相比，B组BALF中细胞总数及EOS、PMN的百分比均显著升高（P <0.01或P <0.05)，MФ的百分比显著降低（P <0.05)，LYM的百分比差异无显著性（P >0.05)。与A组相比，B组BALF中细胞总数及EOS、LYM的百分比均显著降低（P <0.01或P <0.05)，MФ的百分比显著升高（P <0.01)，PMN的百分比差异无显著性（P >0.05)(见表1)。
2.3 PMN中MMP-9的表达 阳性细胞的胞浆呈棕黄色表达，3组中PMN均有不同程度的表达。A组中PMN中MMP-9的表达水平显著高于C组（P <0.01)，B组PMN中MMP-9的表达水平显著低于A组且高于C组（均P <0.01)（见表2、图1)。
2.4 血清TIMP-1的表达 A组血清TIMP-1的表达水平显著高于C组（P <0.01)，B组血清TIMP-1的表达水平显著低于A组且高于C组（P <0.05或P <0.01)（见表2)。
2.5 MMP-9与TIMP-1的相关性 MMP-9与TIMP-1的表达水平呈显著正相关(n=29，r=0.713 P <0.01)。
3 讨论
