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取雌性SD大鼠85只,除正常对照组10只外,其余75只去除双侧卵巢,手术后2周,将手术成功的大鼠随机分组,每组10只。各组按下述剂量每日灌胃给予相应药物1次,正常对照组和模型组：等量生理盐水;阳性对照组：3 g/kg六味地黄丸;工艺A组：11 g/kg;工艺B组：11 g/kg;阴性对照组：11 g/kg。每日灌胃1次,连续给药4周。末次给药30 min后,每鼠阴道内缓缓注入新鲜配制的25 mg/mL TTC水溶液0.1 mL,于阴道内停留30 min,取血,离心,取血清测E2、FSH、LH水平。立即处死,剪取大鼠阴道,纵行切开,分离阴道,剪碎后置离心试管中,加入无水乙醇和四氯乙烯混合溶液4 mL,浸泡提取2 h, 2 000 r/min离心5 min。吸取上清液,以无水乙醇和四氯乙烯混合液作空白对照,于490 nm处测定A值[2-4]医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
结果表明,工艺A组和工艺B组均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。提示工艺A组和工艺B组具有调节机体激素水平的作用。工艺A组的OD值与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),提示工艺A组可明显增加大鼠阴道角化上皮细胞,具有提高雌激素活性的作用。见表1、表2。表1 对卵巢摘除大鼠血清E2、FSH、LH活性的影响(—(—的)±s)表2 对卵巢摘除大鼠雌激素活性的影响(—(—巢)±s)
2.4 对幼鼠子宫、卵巢发育的影响
取未成熟ICR健康雌性幼鼠(体重14～18 g)60只,随机分为空白对照组(灌胃等量生理盐水)、阳性对照组(4.5 g/kg)、工艺A组(16.5 g/kg)、工艺B组(16.5 g/kg)、阴性对照组(16.5 g/kg)。各组均灌胃给予相应药物,剂量0.2 mL/10 g, 1次/d×10 d。末次给药后12 h,脱颈椎处死,解剖,取子宫、卵巢、脾、胸腺,分离脂肪,迅速以电子天平称重。计算脾、胸腺、卵巢、子宫系数 [2]。结果表明,工艺A组促进子宫、卵巢和胸腺生长,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。提示工艺A组具有促进子宫、卵巢发育的作用。见表3。 表3 对幼鼠子宫、卵巢、脾、胸腺发育的影响(—(—鼠)±s)
3 讨论
鞭类中药饮片的服用方法主要包括研粉吞服、煮食和泡酒内服。谭氏等[5]研究结果表明,狗鞭(黄狗肾)饮片匀浆后的混悬液对肾阳虚型动物有不同程度的壮阳作用;文献报道其主要含雄性激素、蛋白质、维生素E、脂肪和有机纤维等成分[6]。
本试验结果表明,乌鳖颗粒中黄狗肾不同乙醇浓度提取工艺(工艺A和工艺B)的提取物均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高;此外,用95%乙醇提取工艺(工艺A)制备的提取物还具有较好的提高大鼠雌激素活性,促进子宫、卵巢生长的作用,这与乌鳖颗粒治疗卵巢功能早衰目的一致。综合上述分析,方中黄狗肾饮片应用95%乙醇提取。
提取黄狗肾所用乙醇浓度不同,对药效的影响也不同,浓度高者药效明显好,这是否提示黄狗肾中极性较低的成分是其有效成分,有待进一步研究。
【参考文献】
[1] 江苏省卫生厅.江苏省中药饮片炮制规范[M].南京：江苏科学技术出版社,1992.443.
[2] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社,2006.836.
[3] 张军武.归肾丸对大鼠卵巢早衰防治作用的实验研究[J].中国现代医药杂志,2008,10(6)：79-80.
[4] 戚本明,戚本玲.葛根提取物对正常及去势大鼠血清雌激素水平影响的研究[J].中国中药杂志,2002,27(11)：850-851.医.学全.在.线网站www.lindalemus.com
[5] 谭兴贵,曾 嵘,贺福元.鹿鞭、狗鞭、牛鞭的壮阳作用实验研究[J].中医药学报,2001,29(6)：33-34.
[6] 窦立院.介绍柴狗肾[J].中药饮片,1993,(1)：32-33.
