1.3 实验动物
40只雄性Wistar大鼠购于上海实验动物中心,体重300~320g。
2 方法
2.1 细胞培养
将C6细胞分装于数只75cm2(底面积)的培养瓶中。加入适量含有体积分数为10%小牛血清的RPMI1640培养液,置入温度37℃、CO25%的培养箱中培养。在细胞处于指数生长期时,以胰蛋白酶适量消化3~5min后,弃去消化液。用Hanks液吹打冲洗1~2次形成细胞悬液,调细胞浓度为每10μl含1.5×106个C6细胞的悬液用于接种。
2.2 颅内接种
将麻醉后的大鼠头部固定在脑立体定向仪上,剪去头顶部毛发,碘伏消毒后铺洞巾。取内眦连线与头部正中矢状面交点向后纵向切开头皮约1cm,分离暴露颅骨。根据Batker法确定右尾状核靶点,于冠状缝前1mm,中线右旁开3mm,以牙科钻在颅骨上钻孔,孔径约1.2mm,深达硬脑膜表面而不伤及脑组织。25μl微量注射器抽取C6细胞悬液10μl,沿骨孔缓慢匀速注射10min,注射完毕后留针5min,缓慢退针,骨孔用医用明胶海绵填充,骨蜡封闭。生理盐水冲洗手术区,无菌丝线缝合切口后消毒皮肤,术后加用青霉素抗感染,整个过程在层流超净台中进行,麻醉复苏后单笼常规饲养14天医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
2.3 实验分组
将40只大鼠随机分为冰片+顺铂治疗组;单用顺铂组;冰片组;空白对照组,共4组,每组10只。
2.4 大鼠体内治疗实验
于术后14天,实验组:灌服10%的冰片石蜡油溶液(m/v)3ml/kg/次,1h后大鼠尾静脉注射顺铂1μg/g,以后每48h给同等剂量冰片+顺铂1次,共计3次。冰片组单用冰片石蜡油溶液。空白对照组则采用同体积石蜡油溶液,无冰片组则未加冰片,其余方法相同。
2.5 试验纪录
①观察大鼠活动状态。②肿瘤最大横径测量。于肿瘤接种21天取大鼠全脑,10%甲醛溶液固定后沿肿瘤中心作冠状切面,水平方向测量每个肿瘤最大横截面面积(包括坏死等病变组织)。③组织病理学检查:所有脑标本固定,脱水,常规石蜡切片,片厚4μm,HE染色,光镜下观察。
2.6 数据统计
统计学处理应用SPSS13.0统计软件进行LSD检验分析。
3 结果