1 资料和方法
1.1 一般资料
SPA400型原子力显微镜(日本精工公司);3000HS型Zetasizer分析仪(英国Malvern公司);vc 130型探头式超声处理机(美国Sonics&Materials公司);DU800型紫外可见分光光度计 (德国Beckman公司);Re300型旋转蒸发仪(英国Stuart公司),卡瓦(陕西三原天域生物制品有限公司提炼厂);大豆磷脂(美国Avanti公司) ;胆固醇(美国sigma公司);Sephadex G75(Pharmacia);其余试剂均为分析纯,实验中用水均为超纯水。
1.2 方法
1.2.1 卡瓦脂质体纳米颗粒的制备与表征 参照文献[5]方法,并加以改进。称取卡瓦油10 mg、胆固醇40 mg、大豆磷脂100 mg置于圆底烧瓶中,加入体积比为5∶1的氯仿与乙醇混合液15mL溶解,于旋转蒸发器上减压蒸发除去氯仿和乙醇。加入60g/L葡萄糖液5 mL作为分散介质,得脂质体初混液,冰水浴超声10 min,制备包载卡瓦的脂质体纳米制剂。取少许颗粒加水混匀稀释,取样滴于云母片上,自然干燥后,利用原子力显微镜表征脂质体纳米颗粒形貌。载药的脂质体纳米颗粒的平均粒径、粒度分布、多分散系数以及Zeta电位通过Malvren Zetasizer 3000HS分析仪测定。
1.2.2 卡瓦脂质体纳米颗粒包封率的测定 (1)紫外光谱扫描:将卡瓦油、卡瓦脂质体纳米颗粒和空白脂质体分别用甲醇水混合液溶解稀释后,在300~500nm处扫描,卡瓦油、卡瓦脂质体纳米颗粒在360nm处有强吸收,空白脂质体在该波长范围无吸收。(2)标准曲线绘制:用甲醇配制60、50、40、30、20和10μg/mL卡瓦溶液,在300~500nm处扫描,以360nm处的吸光度值及对应的浓度线性回归,绘制标准曲线。(3)包封率测定:移取卡瓦纳米制剂1mL过Sephadex G75柱分离(以超纯水为洗脱剂),收集脂质体馏分,加入甲醇溶解并定容,测定吸光度值(条件同标准曲线),计算卡瓦含量。另取对应的卡瓦纳米制剂1mL直接加入甲醇溶解后测定卡瓦的含量。两者相除得包封率。
1.2.3 稳定性实验考察 将制备的卡瓦脂质体纳米颗粒于4℃密封储存60d。每隔20d检查纳米制剂的外观形态、平均粒径、Zeta电位、多分散指数和包封率。
1.3 统计学处理
数据以均数±标准差
2 结果医.学.全.在.线www.lindalemus.com
2.1 卡瓦脂质体纳米颗粒的特性表征
本文制备的卡瓦脂质体纳米颗粒为浅黄色的物质,Zeta电位为(-33.9±2.3)mV,脂质体纳米颗粒的原子力图见图1,制备出来的脂质体纳米颗粒都为较完整的球形,分散性好,颗粒粒径较均匀。颗粒的平均粒径为(99.7±7.6)nm,多分散系数为0.321±0.011,粒径分布如图2所示,粒径分布范围较窄,粒径分布范围为(13~199)nm,其中小于67nm占97%,颗粒大小基本上与原子力图吻合。
图1 卡瓦脂质体纳米颗粒的原子力图
2.2 包封率
2.2.1 标准曲线 不同浓度卡瓦溶液对应的吸收光谱如图3所示。以360nm处吸光度值(A)及对应的浓度(c)作线性回归,绘制标准曲线,见图4,标准曲线回归方程为:c(μg/mL)=50.3A-0.0196,γ=0.9993。
图2 卡瓦脂质体纳米颗粒的粒径分布图 图3 不同浓度的卡瓦溶液对应吸收光谱图 图4 卡瓦标准曲线
2.2.2 包封率测定 脂质体纳米颗粒对脂溶性药物的包封率较高,达到(83.32±0.34)%。