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1.2.5 受精、原核形态学及原核构型的评估
取卵4～6h后对成熟卵子进行受精，16～18h后对卵母细胞的受精情况进行检查。在本研究中，当有两个清晰的原核出现时，确认为卵母细胞已受精。并对合子原核进行评分[6]，同时评估原核与极体的构型关系。
对原核构型的评估采用如下方法：将合子置于覆盖石蜡油的MHTF微滴中，用一根细玻璃管轻轻拨动使其旋转，以便使极体位于6点钟的位置且原核清晰可见，不重叠。这项操作总共不超过15s，且对胚胎不会造成损伤。对原核的构型及形态学进行分析并记录，在原核构型的基础上分为以下四种类型：PN1、PN2、PN3和PN4。PN1型合子其构型为两原核位于10：20或03：50的位置，PN2型合子其构型为两原核位于01：40或08：10的位置，PN3型合子其构型为两原核位于06：00或12：30的位置，PN4型合子其构型为两原核位于02：45或09：15的位置。
在移植入子宫之前，我们对以上种类合子进行进一步的评估，分别对受精后24～26、48、72及120h后的胚胎发育进行评估。根据第3天胚胎的形态学特征进行移植胚胎的选择，在有多余可供选择胚胎的前提下，尽可能选择某一种原核构型和早期卵裂的胚胎，后移入子宫，同时进行黄体支持。
在移植后14d，对血hCG水平进行测定，阳性者定为生化妊娠;移植后25～30d，在B超下鉴定是否有孕囊及胎心出现，均有则视为临床妊娠。
1.3 数据统计分析
实验数据以均值±标准差(Mean±SD)表示。采用SPSS10.0统计软件进行显著性检验。P<0.05为差异显著。
2 结果
2.1 四种不同构型来源的胚胎早期卵裂、优质胚胎、囊胚率的比较
1 375个卵母细胞中,正常受精的有1 032个(除去未成熟、未受精及异常受精的卵子)纳入本研究。在IVF和ICSI病人之间，不同原核构型的比例、受精、卵裂、优胚率及种植怀孕率之间没有显著的差异。具体结果如表1所示,由表中可以看出:合子原核构型主要有四种，依次为PN1(29.58%)，PN2(27.67%)，PN3(22.38%)及PN4(20.37%)。与PN2，PN3相比，PN1，PN4来源的胚胎其早期卵裂率、优质胚胎率及囊胚率均显著增加(P<0.05),PN2和PN3之间差异均不显著(P>0.05)。
2.2 原核构型、早期卵裂与种植率和怀孕率之间的关系
不同原核构型的合子，其早期卵裂率与种植率和怀孕率之间的关系如表2所示，由表中可以看出，与PN2、PN3构型的合子相比，PN1和PN4构型的合子其早期卵裂率显著增高(P<0.05),移植PN1、PN4构型和早期卵裂的胚胎其种植率和怀孕率均显著升高(P<0.05)。PN2和PN3之间各项差异均不显著(P>0.05)。表1 四种不同构型来源的胚胎早期卵裂、优质胚胎、囊胚率的比较注：与PN2相比^P<0.05，与PN3相比△P<0.05表2 原核构型、早期卵裂与种植率和怀孕率之间的关系注：与PN2相比^P<0.05，与PN3相比△P<0.05
3 讨论
胚胎在子宫中能否进行着床并发育，取决于很多因素，包括胚胎质量的好坏，子宫内膜的容受性及胚胎的染色体倍性等遗传学因素是否正常等[7]，选择什么样的胚胎进行移植是关系到IVF成功与否的关键因素之一。因此，能够预示胚胎发育潜力的一些标准变的越来越重要。因而有很多学者从多方面探索一些与胚胎发育和妊娠有关的因素，如受精卵原核的形态及核仁分布及多少，胚胎卵裂的时间，原核与极体的构型关系及是否出现胞浆晕，第3天8细胞胚胎的数量及胚胎的碎片程度等[8]。其中方丛(2006)研究表明移植早期卵裂胚胎可以提高IVFET的成功率，并提高妊娠率[9]。由于原核对胚胎的进一步发育及种植和怀孕有一定的预示作用，所以在近来的一些研究中，原核的形态学引起了广泛的关注。在卵裂之前，原核必须平行于极体[10]，因此我们可以推测原核的构型对卵裂的发生一定存在某种作用，已报道在合子卵裂前，原核将向第二极体方向旋转为合子卵裂做好准备[11]。因此，本实验通过原核构型与早期卵裂来评估胚胎的质量，以期提高试管婴儿的效率。
