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2 实验方法
2.1 菌悬液的制备和含菌培养基的制备取金黄色葡萄球菌斜面培养物,接种于50 ml营养肉汤培养基中,置35～37℃培养约18 h,临用前以营养肉汤培养基为空白在550 nm的波长处测定其吸收度,调整菌液浓度使吸收度为1.0.在抗生素检定培养基Ⅲ中,加入上述实验菌液,加入量为1%(每100 ml中加实验菌液1 ml),摇匀,立即使用。并以未加菌的抗生素检定培养基Ⅲ为阴性空白。
2.2 线性范围及线性关系取庆大霉素标准品适量,精密称定,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH7.8)制成100 u/ml的溶液,再稀释制成 1.0、0.8、0.64、0.52、0.41 u/ml溶液,作为线性实验标准溶液[5]。取上述标准品溶液各1.0 ml,置仪器配备的比色管中,再分别加入含菌培养基9.0 ml,摇匀,密塞,放入CZB1抗生素光度测量仪培养。以不含菌液培养基9.0 ml和1.0 ml无菌水作阴性空白,以含菌液培养基9.0 ml和1.0 ml无菌水作阳性空白。培养温度37℃,测定波长为530 nm.试验设定的5个浓度的标准品溶液剂间比为1∶1.25,从0.4 u/ ml～1.0 u/ ml,吸收度大概在0.2～0.6之间,相邻剂量间的吸收度差约为0.07,有较明显的剂间差。以浓度(C,u/ ml)的对数为横坐标X,吸收度(A)为纵坐标Y进行线性回归,显示线性关系良好,线性方程为:Y=289.380-869.151 X,r=0.999 0.庆大霉素的浓度剂量为1.0 u/ ml和0.5 u/ ml时,吸收度约为0.3～0.6,选取这两个浓度作为二剂量测定时的抗生素浓度,高低剂量比为2∶1.
2.3 回收率考察精密称取庆大霉素标准品适量,用灭菌水制成1 000 u/ ml的标准品溶液。精密量取适量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH7.8)分别稀释制成浓度为1.0 u/ ml和0.5 u/ ml的标准品溶液;分别取相当于标示量的85%、100%、115%庆大霉素标准品,按硫酸庆大霉素颗粒处方中庆大霉素与辅料的比例分别加入相应剂量的辅料,同法稀释制成浓度为1.0 u/ ml和0.5 u/ ml的溶液。分别精密量取上述溶液1.0 ml,置灭菌比色管中,每种溶液各6管,照2.2所述方法测定。回收率在99.3%～101.1%之间,平均回收率100.3%,回收良好，结果见表1.表1 硫酸庆大霉素回收率试验结果医.学.全.在.线www.lindalemus.com
2.4 重复性试验分别取相当于标示量85%、100%、115%庆大霉素标准品适量,按照硫酸庆大霉素处方中庆大霉素与辅料的比例分别加入相应剂量的辅料,同法稀释制成浓度为1.0 u/ ml和0.5 u/ ml的溶液,用二剂量法分别测定含量3次,其RSD分别为1.6%,1.0%和1.2%.
2.5 辅料的影响取空白辅料,按照硫酸庆大霉素颗粒中辅料的量配制不含主药的空白溶液,照上述方法测定,其生长曲线和阳性对照完全一致,没有抑菌作用,说明空白辅料对实验无干扰。
2.6 浊度法和管碟法测定结果的比较取庆大霉素标准品及样品适量,精密称定,用灭菌水制成1 000 u/ ml的标准品溶液,精密量取适量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH7.8)分别稀释制成浓度为1.0 u/ ml和0.5 u/ ml的溶液,高低剂量的剂间比为2:1.分别精密量取上述溶液1.0 ml,置灭菌比色管中,每种溶液各6管,分别加入含菌培养基9.0 ml,摇匀,密塞,放入CZB1抗生素光度测量仪培养3～4 h.阴性对照:磷酸盐缓冲液(pH7.8)1 ml,加9.0 ml未接种实验菌的培养基。分别用管碟法和浊度法的二剂量法对4批硫酸庆大霉素颗粒样品进行含量测定,对4批样品用管碟法和浊度法测得的含量基本一致,可信限FL(%)浊度法更佳,两种方法无显著差异,结果见表2.表2 浊度法与管碟法测定硫酸庆大霉素结果比较
3 讨论
3.1 试验菌液的制备和对试验的影响浊度法测定效价试验中,试验菌液的制备和质量是影响实验的重要因素。制备试验用菌液有不同的方法[710],采用斜面接种试验菌后再用灭菌水洗下菌体制备菌液也可用于试验,但是由于接种量难以控制,后期调整菌液浓度操作会更加繁琐,而采用这种液体培养基培养菌液的方法更加简便,更容易控制菌液的浓度,同时解决了从斜面培养基上直接洗下菌体制成的菌悬液菌体不均匀的问题。
