1.2 试剂甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。
1.3 试药
1.3.1 胡芦巴 经成都中医药大学中药标本中心卢先明教授鉴定,均为豆科植物胡芦巴Trigonella foenumgraecum L.的干燥成熟种子。夏季果实成熟时采割植株,晒干,打下种子,除去杂质。符合《中国药典》2005年版一部167页胡芦巴药材项下有关规定。药材来源与购买地信息具体(见表1)。表1 胡芦巴HPLC指纹图谱研究药材样品
1.3.2 盐胡芦巴 取净胡芦巴饮片1 kg,加规定量的盐水400 ml拌匀后,置密闭的容器内闷润2 h,置设定的温度200 ℃下炒炙炒约35 min,每分钟翻炒30次,取出,放凉。每100 kg药材用食盐2 kg.
2 方法学研究
2.1 色谱条件与系统适应性实验
2.1.1 色谱条件色谱柱 DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱;流动相:乙腈水与乙腈的比例,0~25 min为10%~21%,25~60 min为21%~34%,60 min停止。检测波长:211 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:35 ℃;进样量:20 μl.
2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取胡芦巴(盐胡芦巴)粉末1 g,分别置于50 ml具塞三角瓶中,分别加入10 ml 70%甲醇,密塞,称定重量,超声提取30 min,放冷,称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液3 ml,置10 ml容量瓶中,用70%甲醇定容,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
2.2 方法学考察
2.2.1 精密度考察 取同一供试品(1号样品)溶液,连续进样5次,以考察仪器的精密度。测得各共有峰的峰面积的RSD小于3%,结果表明仪器和整个系统的精密度良好医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
2.2.2 稳定性考察 取同一份供试品(1号样品)溶液,分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h这5个时间点进行检测,以考察样品的稳定性。测得各共有峰的峰面积的RSD小于3%,结果表明供试品在12 h内稳定性良好。
2.2.3 重复性考察 取同一批号(1号样品)的供试品5份,按照供试品溶液的制备和检测方法进行检测,测得各共有峰的峰面积的RSD小于3%,结果表明本方法的重现性良好。
2.3 样品测定
2.3.1 胡芦巴生品HPLC指纹图谱测定[5] 生品胡芦巴共有10个样,对应的高效液相图谱叠加图见图1.
2.3.2 胡芦巴盐炙品HPLC指纹图谱测定 盐胡芦巴共有10个样品,对应的高效液相图谱叠加图见图2.
2.3.3 相似度评价 将所得HPLC指纹普图,选取1号样品作为代表性样品,以其色谱作为代表性指纹图谱,其他样品与之比较,将其原始测试数据输入指纹图谱相似度评价软件中经计算产生的相似度。胡芦巴生品相似度评价结果见表2,胡芦巴盐炙品相似度评价结果见表3.表2 10批胡芦巴生品相似度评价结果表3 10批胡芦巴盐炙品相似度评价结果可见大部分样品图谱的共性特征基本吻合,相互之间的相似度较高,均在0.90以上,符合《中药注射剂指纹图谱技术指南》要求(0.9~1.0)。