1 材料与方法
1.1 实验动物、模型制备及分组
健康雄性清洁级SD大鼠80只,体重(200±20)g,饲养于西安交通大学医学院实验动物SPF中心。随机抽出16只大鼠,作为空白组(A组,n=16),尾静脉注射等容量生理盐水;余下的64只大鼠一次性尾静脉注射阿霉素6mg/kg体重,制备病理模型,3周后50只造模成功。剔除死亡及不合格模型动物后,将50只AN大鼠随机分为:模型组(B组,n=10)、祛风通络方组(C组,n=10)、激祛组(激素和祛风通络方共用,D组,n=10)、激素组(E组,n=10)、苯那普利组(F组,n=10)。第3周起各组每日灌胃1次:A组和B组蒸馏水2mL;C组祛风通络方(含生药2.1g/mL)药液1mL和蒸馏水1mL;D组强的松(25mg/kg)药液1mL和祛风通络方药液1mL;E组强的松药液1mL和蒸馏水1mL;F组苯那普利(0.34mg/kg)1mL和蒸馏水1mL。将空白组和模型组各处死8只大鼠,监测相应指标。实验期间每周检测尿蛋白1次,造模成功及实验结束后各检测1次血清生化指标、超微结构及AS的变化。
1.2 主要试剂及设备医.学全.在.线网站www.lindalemus.com
中药,西安易圣堂大药堂;醋酸强的松,西安利君制药有限公司;苯那普利,北京诺华制药有限公司;阿霉素,浙江海正药业有限公司;聚乙烯亚胺(polyethyleneimine, PEI),美国Sigma公司;H-600透射电子显微镜,日本日立公司。
1.3 尿蛋白及血清学指标的测定
用邻苯三酚红/钼酸盐测定24h尿蛋白定量;用全自动生化分析仪测定血清白蛋白(ALB)、血脂(TCH、TG)和肾功(Bun、Cr)。
1.4 透射电镜观察
1.4.1 肾小球超微结构的观察
取约1mm×1mm×1mm的肾皮质组织块,25mL/L戊二醛4℃固定,10g/L四氧化锇酸后固定,乙醇梯度脱水,环氧树脂与丙酮包埋,聚合成块,超薄切片(50~70nm)后醋酸铀-柠檬酸铅染色,透射电镜观察、摄片。
1.4.2 肾小球基底膜上AS的检测
取1mm×1mm×1mm新鲜肾皮质,5g/L PEI浸泡染色30min,二甲胂酸钠缓冲液冲洗;用戊二醛-磷钨酸混合液常温固定30min,锇酸后固定;脱水、包埋、聚合,超薄切片,透射电镜观察、摄片。AS计数时只用GBM平直的片段,从测定的GBM长度和计数的AS数,计算出平均每1000nm GBM内、外疏松层上的AS数。
1.5 统计学方法
采用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理。计数资料用(±s)表示,组间比较采用两因素方差分析,多重比较采用LSD法,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 24h尿蛋白定量医.学全.在.线网站www.lindalemus.com
阿霉素尾静脉注射后,模型组大鼠的24h尿蛋白定量逐渐增多。3周时与空白组比较,造模组大鼠的24h尿蛋白明显升高(P<0.01),提示造模成功(表1)。造模组大鼠第3周起给予相应干预,每周尿蛋白水平变化见表2。表1 大鼠造模成功前每周尿蛋白的变化(略)与空白组比较,^P<0.01。表2 大鼠造模成功后各组每周尿蛋白的变化(略)
2.2 生化检测结果
3周时与空白组比较,AN组大鼠的ALB降低,TCH与TG明显升高(P<0.01,表3);第7周干预结束后,各组大鼠血液生化指标见表4。与B组比较,C组ALB有一定程度上升,但无统计学意义,E组ALB下降明显(P<0.05);各干预组TCH均有明显改善(P<0.05);各干预组TG下降不明显,激素组反呈现明显升高趋势(P<0.05)。表3 大鼠造模成功时血清生化指标的变化(略)与空白组比较,^P<0.01。A:空白组;B:模型组。表4 各组大鼠7周时血液生化指标的变化(略)