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大量研究证实，应激不仅与多种躯体疾病的发生密切相关[1]，还是许多精神障碍如抑郁症、创伤后应激障碍等发病的主要危险因素[23]。心理、生理和环境应激源作用于机体，通过兴奋下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamicpituitaryadrenal axis, HPA)和交感神经-肾上腺髓质轴(sympathoadreno medullary, SAM)产生生理病理性改变，对内环境稳态的平衡产生威胁[4]。有研究证实，两轴协调性的交互作用可明显改善机体面对各种应激源时的生理状态，降低其活动可提高应激动物的存活率[5]。本实验通过应激前给予肾上腺受体拮抗剂哌唑嗪和普萘洛尔改变SAM轴的功能，通过慢性轻度不可预知模型(chronic unprodictable mild stress, COMS)观察不同肾上腺素能受体拮抗剂对大鼠行为学、血清皮质酮水平(corticosterone, CORT)和中枢海马中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的影响，探讨其应激保护作用的差异。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康雄性Wistar大鼠，2月龄，体质量200～220?g，由山东大学实验动物中心提供。适应性饲养1周，室温(20±3)℃，光—暗周期12?h/12?h，湿度40%～70%。
1.2 仪器与试剂 MGB型迷宫刺激器(江苏三兴教学机械厂);盐酸普萘洛尔片(天津力生制药股份有限公司);盐酸哌唑嗪片(北京双鹤现代医药技术有限责任公司);血清皮质醇放射性免疫试剂盒(南京建成生物技术公司);兔抗iNOS多克隆抗体(SANTA CRUZ公司)，兔抗βactin多克隆抗体(SANTA CRUZ公司);辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司);PVDF膜(0.45?μm，Millipore公司)。
1.3 动物分组及处理 利用旷场实验进行行为学评分，旷场实验水平运动和垂直运动总得分低于30分和高于120分的动物予以剔除，选择得分相近大鼠32只，按随机原则分为4组：对照组8只，正常饲养，生理盐水1.0?mL灌胃;CUMS模型组8只，按程序给予应激刺激，应激前半小时生理盐水1.0?mL灌胃;普萘洛尔组8只，将盐酸普萘洛尔片[10?mg/(kg·d)]溶于1.0?mL生理盐水中，每天于应激前半小时灌胃;哌唑嗪组8只，将盐酸哌唑嗪片[1?mg/(kg·d)]溶于1.0?mL生理盐水中，每天于应激前半小时灌胃。
1.4 模型制备 ①慢性轻度不可预知性应激模型：在21?d内，除对照组所有大鼠随机接受7种不同的刺激：禁水(24?h);禁食(24?h);夹尾(1?min);昼夜颠倒24?h;水平振荡(1次/s,总15?min);噪音(1?500?Hz,92?dB,1?h);束缚(将大鼠置于25?cm×7?cm的塑料箱子内，持续1?h)，每种刺激在21?d内出现3次。每天给予一种刺激，给予的时间也是随机安排，以保证应激在时间和方式上的不可预知性。②急性应激模型：第22天，模型建立结束后，所有大鼠接受电击刺激：电流为1.0?mA，持续刺激5?s,间歇55?s，共60次[6]。
1.5 行为学测定 旷场实验：实验装置为一底面100?cm×100?cm，高40?cm的木箱，底面被等分为25个正方形方格。于实验第1、7、22天的7：30～l2：00之间在安静、光线均匀的房间内进行。实验开始后，将大鼠放于中央方格内观察大鼠的中央格停留时间，5?min内的穿越格数(四爪均进入的方格方可计数，水平运动得分)，直立次数(双前爪腾空或攀附墙壁，垂直运动得分)，清洁运动次数，粪便颗粒数。用5%的酒精清洁旷场后再进行下一只大鼠的观测医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
