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本研究中，龋坏组织检测到双歧杆菌者占22.5%，说明双歧杆菌确实可在深龋组织中检出，但此结果比Becker等[3]的检出率低，可能与取样、培养、人种等因素有关。本研究结果还显示出S-ECC组和无龋组的双歧杆菌的检出情况明显不同。S-ECC组的不同部位均可检出双歧杆菌，且其检出率无明显差异，说明S-ECC儿童的口腔状态有利于双歧杆菌的生存。该结果提示，S-ECC儿童存在口腔微生态环境失衡，在此条件下，双歧杆菌成为条件致病菌，龋损环境有利于双歧杆菌的生长。传统的细菌培养、生化鉴定等方法费时且不稳定，但有助于研究细菌特性;分子生物学方法简便快速，但存在较高的假阳性。本试验将二者结合起来，互补不足，为研究细菌的致病机制奠定基础。口腔内细菌种类繁多，目前尚无一种较好的分离口腔双歧杆菌的选择性培养基[6]。笔者在试验初始阶段，通过对培养基成分的改良和反复筛选，摸索出一种可以较好地分离口腔双歧杆菌的选择性培养基。笔者在原成品双歧杆菌选择性培养基的基础上，加入氯化锂、山梨酸、丙酸钠，它们均有抑制细菌和真菌生长的作用[6，12]，从而为双歧杆菌的分离提供了条件;还加入硫酸新霉素和卡那霉素，二者均为双歧杆菌耐受的抗生素[6]，且容易获得、保存方便。本试验证明，经过改良的双歧杆菌选择性培养基对该菌的选择性较好。当分离样本中含有双歧杆菌时，双歧杆菌的生长较好;而样本中不含双歧杆菌时，少量的其他细菌可在其上生长，如乳杆菌、放线菌等。由此可见，本研究所用培养基对双歧杆菌的分离和挑选提供了很大方便，可推荐作为口腔双歧杆菌的选择性培养基。但该培养基也存在一定的不足之处，如不能抑制乳杆菌、放线菌等口腔常驻菌的生长，对于其他可能混杂的细菌未能进行进一步的种类划分和鉴定。因此，对双歧杆菌的特异性选择培养基还需作进一步的探索。
【参考文献】
[1] 马贺, 胡德渝. 学龄前儿童龋病高发的危险因素[J]. 国际口腔医学杂志, 2008, 35(增刊)：131-133.MA He, HU De-yu. Risk factors of caries in the preschoolchildren[J]. Int J Stomatol, 2008, 35(Suppl)：131-133.
[2] Cole MF, Bryan S, Evans MK, et al. Humoral immunity tocommensal oral bacteria in human infants： Salivary antibodiesreactive with Actinomyces naeslundii genospecies 1 and 2 duringcolonization[J]. Infect Immun, 1998, 66(9)：4283-4289.
[3] Becker MR, Paster BJ, Leys EJ, et al. Molecular analysis ofbacterial species associated with childhood caries[J]. J Clin Mi-crobiol, 2002, 40(3)：1001-1009.
[4] 中华口腔医学会牙体牙髓病专业委员会. 口腔微生物名称(第二版)[J]. 华西口腔医学杂志, 2006, 24(6)：566-570.Chinese Stomatological Association, Operative Dentistry and En-dodontics Field. Name of oral microbes(2nd edition)[J]. WestChina J Stomatol, 2006, 24(6)：566-570.
[5] Crociani F, Biavati B, Alessandrini A, et al. Bifidobacterium in-opinatum sp. nov. and Bifidobacterium denticolens sp. nov., twonew species isolated from human dental caries[J]. Int J Syst Bac-teriol, 1996, 46(2)：564-571.
[6] 凌代文, 东秀珠. 乳酸细菌分类鉴定及实验方法[M]. 北京： 中国轻工业出版社, 1999：108.LING Dai-wen, DONG Xiu-zhu. Classification and verificationof lactic acid bacteria and the epirical method[M]. Beijing： ChinaLight Industry Press, 1999：108医.学.全.在.线www.lindalemus.com.
[7] Barr ES, Berg JH, Bookwalter CA, et al. Definition of earlychildhood caries[J]. Pediatr Dent, 2005, 27(7)：13.
[8] Kaufmann P, Pfefferkorn A, Teuber M, et al. Identification andquantification of Bifidobacterium species isolated from food withgenus-specific 16S rRNA-targeted probes by colony hybridiza-tion and PCR[J]. Appl Environ Microbiol, 1997, 63(4)：1268-1273.
[9] Matsuki T, Watanabe K, Tanaka R, et al. Distribution of Bifi-dobacterial species in human intestinal microflora examined with16S rRNA-gene-targeted species-specific primers[J]. Appl Env-iron Microbiol, 1999, 65(10)：4506-4512.
[10] 周学东, 岳松龄. 实用牙体牙髓病治疗学[M]. 北京： 人民卫生出版社, 2004：108-110.ZHOU Xue-dong, YUE Song-ling. Applied conservative dentistry[M]. Beijing： People′s Medical Publishing House, 2004：108-110.
[11] 肖晓蓉. 口腔微生物学[M]. 成都： 四川大学出版社, 2002：129-132.XIAO Xiao-rong. Oral microbiology[M]. Chengdu： Sichuan U-niversity Press, 2002：129-132.
[12] 李涛, 高伟. 利用正交法研究三种防腐剂对细菌的抑菌效应[J].陕西师范大学学报： 自然科学版, 2007, 35(S1)：27-30.LI Tao, GAO Wei. Inhibition effect of three kinds of food preser-vative on bacteria using orthogonal experiment[J]. J Shanxi Nor-mal University： Natural Science Edition, 2007, 35(S1)：27-30.
