2.3 磁性纳米粒子对PCR体系的影响
Shen等[27,32]研究了将引物共价键合到SiO2包覆的γ-Fe2O3磁性纳米粒子表面的PCR。实验结果表明,引物连接到γ-Fe2O3磁性纳米粒子表面,在合适的条件下,PCR反应能顺利进行。当一条引物(上游引物或下游引物)连接在γ-Fe2O3磁性纳米粒子表面,而另一条引物(下游引物或上游引物)未连接时,PCR几乎不受退火温度的影响;但当两条引物都连接在γ-Fe2O3磁性纳米粒子表面时,PCR受退火温度的影响较大。在一定温度范围内,退火温度越高,PCR产物特异性越好。而且,将引物与磁性纳米粒子连接,产生了新的基于磁性纳米粒子的不对称PCR和对称PCR。一条引物连接到磁性纳米粒子表面的不对称PCR扩增可以产生大量磁性纳米粒子-单链DNA复合物,由于单链DNA产物连接在磁性纳米粒子的表面,所以利用外磁场作用可以很容易地将其分离;而两条引物均连接到磁性纳米粒子表面的对称PCR扩增,产生了一种生产纳米结构聚合物的新方法。
2.4 纳米碳对PCR体系的影响
2.4.1 纳米碳管对PCR体系的影响 Cui等[33]发现单壁碳纳米管(SWNTS)能对PCR产生积极的影响。当SWNTS浓度小于3 g/ L时,能增加PCR扩增的产量;而当SWNTS浓度大于3 g/L时,又会抑制PCR反应。此外,SWNTS还可以在一定程度上模拟PCR缓冲液中Mg2+的重要作用。当PCR反应液中没有Mg2+时,加入SWNTS能得到与Mg2+存在时相似的效果,PCR的产量没有太大的差别,都是在SWNTS浓度为3 g/L时得到最大产量。为了探求实验的机理,他们将SWCNTS分别与DNA、Taq酶进行了孵育,结果发现这些反应成分聚集在SWCNTS周围,能更好的接触而发生反应,因而能提高PCR的效率,增加PCR反应的产量。当SWNTS浓度过高时,因其对PCR反应成分的过多连接而破坏了DNA,Tag酶以及引物的反应条件,从而抑制了PCR反应。而且通过X-射线电子光谱图分析发现,在PCR反应后,SWCNTS的结合能增加,说明其与DNA模板、Taq聚合酶发生了强烈的反应,SWCNTS与PCR各反应成分发生了电子转移,充当了电子受体和聚合酶的稳定剂。
2.4.2 纳米碳粉对PCR体系的影响 Zhang等[34]发现纳米碳粉(CNP)的水悬浮溶液能提高重复PCR和长片段PCR扩增的特异性。在没有CNP的情况下,重复PCR在第4轮扩增就开始出现非特异性条带。第5和第6轮扩增出现了明显的拖尾,几乎没有目标条带。而加入适量的CNP悬浮液后,PCR即使到了第6轮扩增也能得到单一的目标条带。同时,在长片段PCR扩增中加入CNP悬浮液可以使拖尾现象显著减少,非特异条带逐渐消失。但是,CNP的浓度必须在一定范围内才会有效,浓度太低不能有效提高PCR的特异性,浓度过高又会抑制PCR反应。原子力显微镜结果说明CNP与双链DNA之间存在潜在的结合力,因此反应的机理可能是这种结合力减少了引物与DNA模板之间的错配以及引物二聚体的产生,因而可以提高PCR的特异性。但过高浓度的CNP会产生过高的结合力,又会阻碍PCR的反应。但是CNP对PCR有这样的影响,还有可能是CNP与DNA聚合酶发生了相互作用,反应机理尚需进一步探讨。
2.4.3 富勒烯(C60)对PCR反应的抑制作用 张捷等[35]研究了富勒烯(C60)对PCR的影响。随着C60浓度的增加,PCR扩增被显著抑制。C60一方面会抑制DNA聚合酶的活性,且浓度越高,抑制作用越大,另一方面又会损伤DNA单链模板,降低DNA单链模板起始浓度,从而造成PCR产物量的降低。他们认为,这是C60与DNA聚合酶的酶活性位点发生了相互作用,导致DNA聚合酶活性降低,同时C60还会结合到DNA单链模板上,干扰引物、底物与模板之间的精确配对,另外,C60可在PCR实验条件下活化生成多种活性氧或自由基,进而造成DNA聚合酶构象的改变以及DNA模板的损伤,抑制了PCR反应的进行。
2.5 半导体纳米材料对PCR体系的影响
Nie等[36]发现表面带氨基的SiO2包覆的四足状ZnO纳米结构能提高PCR扩增的产量。由SiO2包覆的四足状ZnO,当表面有氨基修饰并且加入量由0.01 μg逐渐增大到0.5 μg时,PCR产物的量不断增多;当加入量>0.5 μg时,PCR产物的量却不再增加。表面修饰了氨基的ZnO纳米结构在一定浓度范围内能提高PCR扩增的产量。当表面没有氨基修饰,ZnO纳米结构的量≤0.06 μg时,PCR产物的量变化不大;而当ZnO纳米结构的量≥0.12 μg时,PCR产物的量减少。其反应机理还不明确医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
Wang等[37]考察了表面修饰了羧基的CdTe量子点对PCR体系特异性的影响。实验结果表明,在不同的退火温度下,CdTe量子点能提高PCR体系的特异性,而且在扩增短片段时,量子点对PCR体系特异性的提高比扩增长片段时提高的更明显。同时,CdTe量子点不能提高PCR的效率。CdTe量子点可以作为常规PCR的优化因子,尤其是对多重PCR,因而可以拓宽PCR的应用范围,同时也对基因诊断具有重要的意义。他们认为反应机理可能有两方面:(1)与金纳米粒子相似,CdTe量子点模拟了体内DNA复制过程中单链结合蛋白SSB的作用,选择性地结合了单链DNA,从而显著降低了DNA复制过程中引物和模板的错配,有利于提高PCR的特异性;(2) CdTe量子点可能与DNA聚合酶发生了相互作用,聚合酶吸附到量子点的表面,使PCR体系中聚合酶的有效浓度降低,从而有利于目标产物的产生,提高了PCR的特异性。但随着量子点的不断增多,聚合酶浓度不断降低,当聚合酶浓度小于特异扩增需要的有效浓度时,量子点的加入又会对PCR产生抑制作用。