 |
 |
1.3 细胞毒性实验
取对数生长期细胞，按8×104/孔接种于96孔板中（200 μL/孔)，每组设6个重复孔。SFN孵育结束前4 h各孔加入MTT溶液20 μL（5 mg/mL)，随后弃上清，并加入200 μL DMSO，充分混匀，用酶标仪测定各孔的吸光度值（OD570)，计算细胞的相对活性，计算公式为：处理组OD值/对照组OD值×100%。
1.4 ELISA
采用双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清中的IL-1β和HO-1，按照深圳欣博盛生物技术有限公司提供的试剂盒操作进行。其检测下限分别为10 pg/mL和5 pg/mL。
1.5 统计学分析
采用SPSS 15.0 统计学软件处理数据，结果采用均数±标准差（x±s)表示，多组比较采用One-way方差分析并行Student’s t检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同浓度SFN对bEnd.3细胞生长抑制率的影响
为了探索SFN唑最佳的作用浓度，本研究采用（0～30) μg/mL对bEnd.3细胞的活性进行了观察，结果显示，（0～30) μg/mL SFN唑对bEnd.3细胞增殖活性无明显影响（图1)，因此随后的实验将用浓度高达30 μg/mL的SFN进行。
2.2 SFN对TNF-α诱导bEnd.3细胞产生IL-1β的影响
TNF-α刺激前，bEnd.3细胞无IL-1β产生。5 ng/mL TNF-α处理后，IL-1β含量明显升高。而10～30 μg/mL SFN能明显降低TNF-α诱导的IL-1β产生，见图2。
2.3 SFN对HO-1表达的影响
ELISA结果显示，bEnd.3细胞未刺激条件下HO-1表达水平较低。TNF-α处理后HO-1表达有所增加；而SFN处理后，与TNF-α相比HO-1表达进一步增高（图3)。
2.4 HO-1抑制剂与激动剂对TNF-α诱导bEnd.3细胞产生IL-1β的影响
HO-1抑制剂ZnPP预处理后，能减弱SFN对IL-1β的抑制作用。而HO-1激动剂CoPP则能进一步协同SFN降低TNF-α诱导的IL-1β产生（图4)医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
