1.4 实验方法
1.4.1 动物建模 40只大鼠预养一周后,随机选取一组10只为正常对照组,剩余30只空腹12 h,腹腔注射1% STZ-柠檬酸钠缓冲液35 mg/kg体质量。对照组注射等量柠檬酸钠缓冲液,依据72 h后尿糖+++~++++,尾静脉采血测血糖,血糖≥16. 7 mmol/L者,确定模型建立。除去造模失败及实验过程中死亡大鼠,将糖尿病鼠22只纳入本实验。
1.4.2 分组 (1)正常对照组(CN组10只):糖尿病鼠随机分为;(2)糖尿病组(D组11只):(3)葛根素治疗组(S组11只),S组每只给予160 mg/kg/d葛根素注射液进行腹腔注射,CN组腹腔注射等容量0.9%氯化钠溶液,均连续干预14周。
1.4.3 标本采集 第14周实验终止时,各组大鼠在禁食的基础上,用代谢笼收集24 h尿液,测定尿白蛋白含量,动物经乙醚麻醉后心脏取血。测试生化指标:(1)空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)采用便携式血糖仪测定;(2)尿微量白蛋白(urinary microalbumin,U-mAIb)采用ELISA法测定;(3)内皮素(endothelin,ET)采用放免法测定;(4)降钙素基因相关肽 (CGRP)用放免法测定。
1.5 统计学方法
所有数据用SPSS 12.0软件进行统计分析,实验所得数据均以均数±标准差(x±s)表示,各组均数之间均用单因素方差检验(one-way ANOVA)进行差异性比较,其中P < 0.05为差异有统计学意义,P < 0.01为差异有高度统计学意义。
2 结果
2.1糖尿病大鼠模型的建立
注射STZ后72 h,糖尿病组空腹血糖明显升高(P < 0.01),空腹血糖均值达到19.51 mmol/L;葡萄糖耐量试验:两组大鼠禁食12 h后,按2 g/kg·BW葡萄糖进行灌胃,尾部微量取血,分别测0.5、1.0、2.0 h血糖。实验组大鼠1 h血糖值达到高峰,2 h仍高;对照组0.5 h达到高峰,2 h恢复空腹水平,提示实验组出现糖耐量异常,且实验组大鼠空腹血糖≥16. 7mmol,表明糖尿病大鼠造模成功。见表1。
2.2 葛根素干预对DN大鼠相关生化指标的影响
各组测得FBG、U-mAIb和ET值,D组和S组都较CN组显著升高(P < 0.05),经过14周葛根素干预后,S组较D组显著下降(P < 0.05);而血浆CGRP值,D组和S组较CN组显著下降(P < 0.05),且S组较D组明显升高(P < 0.05)。见表2。