病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。临床医师根据流行病学资料,疾病的症状与体征综合判断可能为何种病毒感染,留取适宜的标本送检。
一、检材的采集与送检
病毒性疾病通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。
供分离病毒、检出核酸及抗原的标本的,要求:
(一)尽早采取在发病初期(急性期)采取,较易检出病毒,越迟阳性率越低。
(二)部位适宜由感染部位采取,如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰;肠道感染采取粪便;脑内感染采取脑脊液;皮肤感染采取病灶组织;有病毒血症时采取血液。
(三)冷藏速送病毒离活体后在室温下很易死亡,故采得检材应尽快送检。若距离实验室较远,应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。污染检材,如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素或庆大毒素等,以免杂菌污染细胞或鸡胚,而影响病毒分离。
检测特异性抗体需要采取急性期与恢复期双份血清,第一份尽可能在发病后立即采取,第二份在发病后2~3周采取。血清标本放4℃-20℃保存,试验前血清标本以56℃30分钟处理去除非特异性物质及补体。无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性lgM。
表23-1 病毒检材采集与检验结果的关系
采取标本的时期 |
检查病毒及其成分 |
测定抗体 |
潜伏期及前驱期 刚发病或急性期 恢复期及康复期 |
较难查见 最多查见 很难查见 |
未增多
未增多或增多不明显 明显增多(常超过4倍) |
表23-2 供病毒分离的检材
临床表现 |
常见病毒 | 帮助诊断有用的检材 |
呼吸道感染 |
腺病毒
巨细胞病毒 流感病毒 副流感病毒 呼肠孤病毒 合胞病毒 |
咽试、肛拭
咽试或含漱液、尿液 咽拭或含漱液 咽拭含漱液 咽拭、粪便或肛拭 咽拭或含漱液、鼻咽洗液 |
出疹疾病 | 柯萨奇病毒
巨细胞病毒 埃可病毒 EB病毒 单纯疱疹病毒 麻疹病毒 风疹病毒 |
粪便或肛拭、咽拭
咽拭或含漱液、尿液 粪便或肛拭、咽拭 咽拭或含漱液 病灶棉拭或吸取液、咽拭 咽拭或含漱液、尿液 咽洗液、鼻咽拭 病灶棉拭或吸取液、咽拭 |
脑炎 | 虫媒病毒
单纯疱疹病毒 麻疹病毒 脊髓灰质炎病毒 |
血液、脑脊液
脑活检、脑脊液、疱疹棉拭或吸取液 脑脊液、咽拭或含漱液、尿液 粪便或肛拭、咽拭、脑脊液 |
无菌性脑膜炎 | 柯萨奇病毒
埃可病毒 腮腺炎病毒 |
脑脊髓液、粪便或肛拭、咽拭
脑脊液、粪便或肛拭、咽拭 脑脊髓液、口颊粘膜棉拭 |
失天或新生儿感染 | 巨细胞病毒
风疹病毒 单纯疱疹病毒 |
尿液、咽拭或含漱液
咽拭或含漱液、尿液 病灶棉拭或吸取液、回拭 |
眼部感染 | 腺病毒
单纯疱疹病毒 |
结膜棉拭、咽拭、肛拭
结膜棉拭、病灶棉拭或吸取液、咽拭 |
其它感染
巨细胞包涵体疾病 单核细胞增多综合征 |
巨细胞病毒
巨细胞病毒 EB病毒 柯萨奇B病毒 埃可病毒 |
尿液、咽拭
尿液、咽拭 咽拭或洗液 心包液、粪便、咽拭 心包液、粪便、咽拭 |
二、病毒的分离与鉴定
(一)病毒的分离
病毒分离的一般程序是:
检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种 | 易感的动物→出现病状
鸡胚→病变或死亡 细胞培养→细胞病变 |
→鉴定病毒种型(血清学方法) |
无菌标本(脑脊液、血液、血浆、血清)可直接接种细胞、动物、鸡胚;无菌组织块经培养液洗液洗涤后制成10~20%悬液离心后,取上清接种;咽洗液、粪便、尿、感染组织或昆虫等污染标本在接种前先用抗生素处理,杀死杂菌。