(六)中枢兴奋药实验
去水吗啡对不同种属动物具有不同的作用,对某些动物(如狗、猫)可引起顽固性呕吐;对另一些动物(如马、牛、啮齿类动物)则可引起惊恐、运动性增高和强制性的啮齿动物(Guawing);鸽则引起强烈性的啄凿。为了研究药物对去水吗啡的作用,多认为选用具有温和啮齿作用的小白鼠为宜。以观察药物能否拮抗去水吗啡引起的小白鼠啮齿动作,来测定其中枢兴奋的强度。
引起食欲抑制的药物大多为中枢兴奋药,所以测定药物对动物食物摄取量的影响。可作为中枢兴奋药的筛选指标之一。常选用猫来研究食欲抑制药物有无耐药性及其发生速度。亦可选用小白鼠或采用全硫葡萄糖(Aurthioglucose)喂饲的小白鼠肥胖模型来研究食欲抑制药。
二、传出神经药理学实验中的选择与应用
(一)一般实验方法和动物的选择
在测定新药的急性毒性实验(LD50)时,动物如出现竖毛,活动增加,激动兴奋,以致发展为强直一阵挛性抽搐,可初步考虑为拟交感药。进而可观察其动物(或猫)血压的反应,如兴奋α-受体,则对血压影响较大,并反射地使心率减慢,如兴奋β受体,可见血压下降和心率明显增快。为了较确切地区分其对α、β受体的作用,还可采用α受体阻断药酚妥拉明,β受体阻断药心得安等作为工具。除血压实验外,尚可采用猫瞬膜,猫(或狗)在体肠活动等实验方法。利用一些体外实验可分析拟交感药的作用部位,其中最敏感的实验之一是大白鼠胃底条,此外有兔头肌、离体兔耳、豚鼠气管链、豚鼠回肠和鸡盲肠等制备。可用已知的α或β-受体兴奋剂作为标准,观察它们与α或β-受体阻断药的相互作用,而确定其作用部位。
乙酰胆硷具有毒蕈碱样及菸碱样作用,前者可被阿托品阻断,后者可被神经节阻滞药及横纹机松驰药阻断。凡是通过直接或间接作用兴奋副交感效应点的药物可出现流泪、流涎、排尿和排便症候群。因此在小白鼠LD50实验中可获得初步印象,进而分别观察其对血压、唾液、瞳孔及胃肠道等反应。在猫血压实验、蛙心、蛙腹直肌、水蛭背肌等标本上可检定拟胆碱药和观察抗胆碱药的作用,亦可用整体实验如抑制大白鼠胃溃疡,抑制大白鼠肠内活性炭下移等方法观察之。
(二)心血管实验
血压实验是检验传出神经药物极其敏感的方法,一般采用急性血压实验,动物中以狗、猫、兔和大白鼠常用。兔不适用于降压实验,因其易于死亡。实验可用麻醉或毁脑动物,因麻醉动物的血压常有三级波动(第一级波动,又称脉搏性波动,系每次心搏影响血压所致,第二级波动,又称呼吸性波动,即吸气时,血压微升,呼气时血压微降;第三级波动,系血管运动中枢以稍长间隔,兴奋性周期性改变),使血压升降不稳。如动物毁脑后,可排除脊髓以上的中枢神经神经对血压的影响,只出现第一级波动,血压曲线极不平衡。
离体兔主动脉条实验:兔主动脉上含有α-受体,它是测定作用于α-受体药物的一个很好标本,已被广泛用来鉴定和分析拟交感药及其对抗药的作用。兔主动脉制备曾试制过多种形式,如主动脉环、片及条状等,但兔主动脉螺旋条是最合适的方法之一。此标本有较多优点,如一个主动脉可制作3~4个标本,可供配对试验,对低浓度拟交感药就很敏感,组织稳定性好,可维持较长时间。
(三)消化道平滑肌实验
多种动物的离体肠道可用来试验传出神经药物,一般多用离体豚鼠及兔的肠道。豚鼠回肠的自发活动较少,描记时有稳定的基线,适合作药物鉴定用。兔肠(尤其空肠)具有规则的摆动运动,适用于观察药物对此动物的影响。豚鼠回肠标本加负荷后已完全松驰,因此加入拟交感药不会使其更松驰。
离体豚鼠回肠可用于观察乙酰胆碱(Ach)和拟胆碱药的剂量-反应关系;可检定Ach和拟胆碱药的含量。离体兔空肠有节律性收缩活动,可观察肾上腺素(4μg)、去毒豆碱(2μg)等药物对空肠摆动运动的影响。大白鼠胃底条是检定儿茶酚胺类药物和5-羟色胺(5-HT)最敏感的标本。主要观察药物对胃纵行肌的作用,因标本中环形肌已切断。经检定儿茶酚胺对其敏感度要比大白鼠子宫标本大10~100倍。鸡食道由副交感神经支配,因此离体鸡食道标本适合于试验拟副交感药物。由于其作用不能完全被神经节阻断药所阻滞,故不宜用于试验作用于神经节的药物。
(四)其它平滑肌等实验
大白鼠子宫中肾上腺素能受体主要是β-受体,最适用于试验β兴奋剂和β-阻断剂。它对异丙肾上腺素最敏感,肾上腺次之,对去甲肾上腺素极不敏感,因此亦可用来检定含肾上腺素与去甲肾上腺素的混合液中前者的含量。
虹膜括约肌受副交感神经支配,当此神经兴奋或应用拟胆碱药时,瞳孔缩小,抗胆碱药使瞳孔散大,虹膜辐射肌受交感神经支配,此神经兴奋或应用拟交感药后使瞳孔散大。因此可利用动物的瞳孔来测试某药系拟胆碱药、抗胆碱药或拟交感药。常选用兔和猫的瞳孔进行试验。猫瞳孔对药物反应较灵敏。不麻醉狗的瞳孔不稳定,拟交感药对其作用极短暂。
离体猫脾条对儿茶酚胺类很敏感,适用于检测拟交感药和α-阻滞药。脾条对拟交感药的反应较慢,开始迅速收缩后,即慢慢上升,3~5分钟收缩达高峰,恢复亦慢,即使接触低浓度的拟交感药,亦需5分钟恢复,如用引起最大反应的浓度时,常需2小时才恢复。此标本对异丙肾上腺素不敏感,一般浓度达2×10-5M才出现反应,5×10-2M达最大反应。
水蛭的背肌和蛙复直肌一样,Ach使之收缩,用毒扁豆毒碱处理后,对Ach敏感性大增,此时Ach的剂量即使低到10-5M或以下,亦能使悬于5ml浴槽中的肌肉收缩,因此适用于测试微量的未知拟胆碱药。亦适于测定刺激神经(如猫颈上神经)后释放的Ach量。
蛙复直肌标本可用来检测阻断神经肌接点的药物反应和检定Ach和拟胆碱药,方法简便易行,结果较正确。但在检定Ach时,在有毒扁豆碱存在的条件下,其敏感性不及豚鼠回肠和水蛭背肌。
(五)影响传出神经递质的药物实验
1.猫瞬膜:猫的瞬膜形大且反应灵敏,因此是进行瞬膜实验首选和最适合的动物。狗和兔虽然也有瞬膜,但形小,用药后变化较小,且兔的瞬膜反应性有不同,故后两种动物一般不采用。瞬膜由颈上神经节后纤维支配,属肾上腺素能神经,瞬膜内存有α-受体。猫的瞬膜标本在鉴别神经节阻滞药和α-受体阻滞药研究中也是常用的方法之一。如受试药物是神经节阻滞药,则刺激节前纤维和注入酰胆碱均无瞬膜反应,而刺激节后维或注入去甲肾上腺素仍有瞬膜反应。若受试药物是影响递质的,则刺激节前纤维、节后纤维或给乙酰胆碱均无瞬膜反应,给去甲肾上腺素瞬膜反应仍存在,甚至增强其反应,以资鉴别这两类药物。
2.兔肠系膜神经:离体兔肠系膜神经一回肠实验常选用兔的回肠制备较为合适,因为兔肠的摆动动物(钟摆运动)波辐射较大。豚鼠的肠制备也可用,但摆动波辐小,用药后抑制反应不易看出。猫、狗等肠壁厚,对儿茶酚胺类药物和其它药物反应迟钝,故不选用。刺激肠系膜神经(系肾上腺系能神经)可抑制回肠的摆动运动。如受试药物能阻断这一抑制反应,而不影响甚至增强去甲肾上腺素或肾上腺素对回肠摆动运动的抑制作用,则可推断该药是肾上腺素能神经阻断滞药。
3.兔耳:兔耳灌流法是筛选肾上腺素能神经阻滞药和α-受体阻滞药常用的方法之一。前一类药物能抑制耳大神经刺激引起的血管收缩反应,使灌流量增加,但去甲可肾上腺素或肾上腺素引起的血管收缩反应反而增强,使其灌流量减少。根据上述作用,可以鉴别这两类药物。根据1960年Hukoric在离体兔耳灌流研究中认为耳大神经除含有肾上腺素能神经外,还有少部分胆碱能神经。用肾上腺素能神经阻滞药后胆碱能神经的作用表现得更充分,因此,在实验设计中,用阿托品8μg阻断其毒蕈碱样作用,使其不干扰肾上腺素能神经阻滞药物研究。
4.猫脾神经:脾神经-脾标本制备在肾上腺素能神经阻滞药或α-受体阻滞药的研究中是常用的方法之一。前一类药使用后,刺激神经,使脾静脉血中去甲肾上腺素含量降低;后一类药使用后,则使去甲肾上腺素含量增加,以此来鉴别两类药物。常选用猫来作此实验。
5.豚鼠下腹神经-输精管:下腹神经是交感神经节后纤维,支配输精管或子宫。该实验在研究肾上腺素能神经阻滞药和α受体阻滞药中是常用的方法之一。受试药物能阻滞刺激下腹神经引起的输精管或子宫收缩作用,却不能影响去甲肾上腺素或肾上腺素的反应,甚至可增强其作用,则可确定该药为肾上腺素能神经阻滞药。豚鼠的输精管对交感胺的收缩反应较子宫迅速,洗去后恢复也较快,因此常选用豚鼠作此标本进行试验。
6.兔交感神经-心房:离体兔交感神经-心房标本主要用于观察肾上腺素能神经阻滞药的作用。刺激交感神经,引起心率加速,收缩力加强。这类药使用后,阻断上述反应,但不能对抗去甲肾上腺素或肾上腺素对心脏的兴奋作用。此标本制备除主要选用兔外,小猫(1~2Kg重)、豚鼠也可采用。
7.大白鼠血压:R.Lesic等在大白鼠血压实验中发现毒扁豆碱能引起升压反应,而在狗、猫、鼠等实验动物中,该药主要引起降压反应。利血平能阻断大白鼠对毒主扁豆碱的升压作用。切除两侧肾上腺,不影响其升压反应,便横断脊柱,其升压反应立即消失。因此,他们认为大白鼠对毒扁豆碱的升压反应可能是中枢性的,再通过外周交感神经表现出来。毒扁豆碱引起的大白鼠升压反应的实验模型可用来研究影响肾上腺素能神经递质释放的药物。如某药物使用后,再注射毒扁豆碱,其升压作用消失,便去甲肾上腺素或肾上腺素的升压作用仍不变,甚至增强,则可能提示该药为肾上腺素能神经阻滞药。