自1983年Warren和Mashall首次从胃粘膜标本中分离培养出幽门弯曲菌(Campylobacter Pylori),并提出它可能与慢性胃炎(CG)和溃疡病(PU)病密切相关后,引起了全球关注,也为CGG、GU的病因学研究开创了一条新途征。1990年9月国际微生物联合会鉴定为“幽门螺杆菌”(Helicobacter Pylori, Hp)。我国是慢性胃病多发国家,自1985年张振华首次报告从胃粘膜中检出此菌后,已有不少单位对此进行研究,我院自1988年5月以来开展了此项研究,对325例因上消化道症状行内镜检查者进行研究,旨在从临床分析探讨Hp与慢性胃炎、消化溃疡和胃癌的关系。
1 对象和方法
1.1 对象
具有上消化道症状的325例,男248例,女77例;年龄17岁~75岁,平均年龄43.9岁。根据内镜及组织学诊断,慢性浅表性胃炎(CSG)72例,慢性萎缩性胃炎(CAG)34例,胃溃疡(GU)54例,球部溃疡(DU)108例,胃癌(GC)13例,正常(N)14例。按胃粘膜中是否有中性粒细胞浸润将胃炎分活动性和非活动性胃炎。
1.2 方法
用OlymPus GIF XQ10内镜进行检查,CG,DU,N组取距幽门5cm内的胃窦粘膜,GU取溃疡边缘粘膜,GC取癌组织,各取4~5块,分别作细菌培养、直接涂片、组织切片、HE染色及改良Warthin-Starry染色,部分作扫描电镜观察。将活检标本接种于肉浸液加8%~10%羊血琼脂平板中,于改良厌氧灌(5%O2,7%CO2,80%N2,8%H2,湿度98%)内,37°C,培养3d~5d,见1mm~2mm大小的露滴样、光滑、灰白色、轻度溶血的菌落,菌落涂片镜检,生化鉴定(尿素酶、氧化酶、触酶、马尿酸分解试验等)。7d不见菌落者阴性。Hp阳性标准:培养阳性或尿素酶阳性加直接涂片、改良W-S染色阳性中任一项阳性者。活检标本用10%福乐马林固定、切片厚5μm,常规HE染色,作组织病理学诊断。改良W-S染色,在10×100倍光镜下寻找Hp。供扫描电镜(SEM)观察的标本先用生理盐水轻轻冲洗粘膜面,用2.5%戊二醛固定及1%锇酸固定后,经脱水,临界点干燥、喷金后,在日立S—570型电镜下观察。所有资料按四格表行X2检验,若例数小于40或理论值小于1,则采用确切概率法计算。
2 结果
2.1 各种胃病Hp的检出率
胃粘膜标本分别用4种方法检测,Hp的检出率分别为尿素酶试验69.9%,直接涂片52%,改良W-S75.1%,培养63.1%;以改良W-S法检出率最高,直接涂片法检出率最低;其中直接涂片法与其它三种方法比较,差异有非常显著性(P<0.05);培养法与改良W-S比较,差异有显著性(表1,P<0.05)。
Hp的总检出率为70.2%,CSG,CAG,GU,DU的Hp检出率高于N组,差异有非常显著性(P<0.01);(均P<0.01);DU检出率高于CAG,CSG,GU组(均P<0.01);CSG,CAG,GU组间两两比较,Hp检出率无显著差异(表2,P<0.05)。
表1 胃十二指疾病Hp检出率
项目 | CSG | CAG | GU* | DU* | GCa | N | 合计 | 阳性率 |
例数 | 102 | 34 | 54 | 108 | 13 | 14 | 325 | |
尿素酶试验 | 72 | 24 | 34 | 94 | 3 | 0 | 227 | 89.9% |
直接涂片 | 65 | 17 | 26 | 80 | 1 | 0 | 169 | 52.0% |
改良W-S | 76 | 26 | 39 | 98 | 4 | 1 | 244 | 75.1% |
培养 | 68 | 19 | 30 | 86 | 1 | 1 | 205 | 63.1% |
*表示均伴有慢性胃炎
表2 胃十二指肠疾患Hp检出率
项目 | CSG | CAG | GU | DU | GCa | N | 合计 |
例数 | 102 | 34 | 54 | 108 | 13 | 14 | 325 |
阴性数 | 72 | 24 | 34 | 94 | 3 | 1 | 228 |
阳性率(%) | 70.1 | 70.6 | 63.0 | 87.0 | 23.1 | 7.1 | 70.2 |
2.2 组织病理学检查
改良W-S染色中Hp存在于胃粘膜表面上皮细胞粘液层间、胃小凹中,菌量多时可在浅层腺体的腔中见到。在浅黄色背景上呈棕色或棕褐色弯曲状、弧形菌。在慢性胃炎中,Hp的存在与炎症的活动性密切相关(表3,表4)。在CSG组57例活动性胃炎,Hp阳性55例;45例非活动性胃炎,17例Hp阳性;二者比较差异有非常显著性(P<0.05);在CAG组,20例活动性胃炎,19例为Hp阳性,14例非活动性胃炎,5例Hp阳性,二者比较差异显著性(P<0.05)。
表3 慢性浅表胃炎活动性与Hp检出率
活动性 | 阳性 | 阴性 | 合计 |
有 | 55 | 2 | 57 |
非 | 17 | 28 | 45 |
合计 | 72 | 30 | 102 |
表4 慢性萎缩性胃炎活动性与Hp检出率
活动性 | 阳性 | 阴性 | 合计 |
有 | 19 | 1 | 20 |
非 | 5 | 9 | 14 |
合计 | 24 | 10 | 34 |
2.3 SEM观察
对4例慢性胃炎标本进行SEM观察,这4例用上述4种方法均检出Hp。电镜下见Hp呈弧形或“S”形,少数量椭圆形或肾形。约0.5μm×2.5μm大小,菌体光滑,中央部分电子密度低,两端钝圆,有1~5根单极鞭性鞭毛。Hp紧贴胃粘膜上皮细胞。