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 医学全在线 > 理论教学 > 基础学科 > 生物化学与分子生物学 > 正文
目的基因序列的来源和分离
来源:医学全在线 更新:2007/12/3 字体:

  一、基因组DNA文库

  从生物组织细胞提取出全部DNA,用物理方法(超声波、搅拌剪力等)或酶法(限制性核酸内切酶的不完全酶解)将DNA降解成预期大小的片段,然后将这些片段与适当的载体(常用噬菌体、粘粒或YAC载体)连接,转入受体细菌或细胞,这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子,而且可以繁殖扩增,许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆的集合体,就称为基因组DNA文库(genomic DNA library)。如果这个文库足够大,能包含该生物基因组DNA全部的序列,就是该生物完整的基因组文库,能从这文库中钓取该生物的全部基因或DNA序列。从基因组含有生物生存、活动和繁殖的全部遗传信息的概念出发,基因组文库是具有生物种属特异性的。

  构建基因组文库,再用分子杂交等技术去钓取基因克隆的方法,称为鸟枪法或散弹射击法,意味着从含有众多的基因序列克隆群中去获取目的基因或序列。当生物基因组比较小时,此法较易成功;当生物基因组很大时,构建其完整的基因组文库就非易事,从庞大的文库中去克隆目的基因工程量也很大。

图20-8 基因组DNA文库的构建

  二、cDNA文库

  以mRNA为模板,经反转录酶催化合成DNA,则此DNA序列与mRNA互补,称为互补DNA或cDNA。提取出组织细胞的全部mRNA,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库,基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组DNA文库所含的是带有含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。医学全在线www.med126.com

图20-9 cDNA文库的构建

 

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