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 医学全在线 > 理论教学 > 基础学科 > 免疫细胞与核酸分子杂交 > 正文
免疫细胞化学在细菌学中的应用
来源:医学全在线 更新:2007/12/3 字体:

 

  一、甲组溶血性链球菌的快速检查法

  (一)试剂制备

  用抗甲组溶血性链球菌的抗体,以FITC标记,制成荧光抗体,再用C和G链球菌充分吸收;或用抗I型链球菌M蛋白成分的血清,标记后吸收,都有可靠的特异性。

  (二)检查方法

  (1)以棉拭子擦拭患者咽部粘膜,取标本。

  (2)将拭子浸入1ml肉汤小试管内,37℃培养2~3h。

  (3)取出棉拭了作分离培养,常规鉴定。将肉汤液离心3~4min,3000r/min,弃上清,沉淀加0.01mol/l Ph7.2 PBS 洗涤,再离心沉淀,弃上清。

  (4)以沉淀涂片,直径约1cm,涂两个圆形区。

  (5)将标本放入95%酒精中固定1min,然后浸入PBS中洗1次,取出室温晾干。

  (6)直接法染色,左侧标本作对照,加非溶血性链球菌荧光抗体染色。右侧加甲组溶血性链球菌荧光抗体染色。置湿盒中孵育20~30min,再用PBS洗2次,每次5min,振动洗涤,滤纸吸干标本周围的水。

  (7)加缓冲甘油封裱,立即荧光显微镜观察。

  免疫荧光检出的阳性率较培养法为高,因为前者可以检出抗菌素治疗后的死菌。二者符合率达95%。

  二、脑膜炎双球菌的快速检查法

  (一)制备荧光抗体

  可用多价和I、II、III、IV型单价的脑膜炎球菌抗血清,分别制备多价和单价荧光抗体。

  (二)检查方法

  用患者咽拭子,脑脊液或培养标本制备涂片,晾干,火焰或乙醇固定,37中染色30min,荧光显微镜检查。

  抗脑膜炎双球菌的荧光抗体有很高的特异性,可以快速检出和鉴定脑膜炎双球菌。有人应用免疫荧光检查267例脑膜炎病人脑脊液中脑膜炎双球菌,阳性率73.4%,培养和普通染色则只分别为41.9%和34.4%。

  三、霍乱弧菌和副霍乱弧菌的快速检查法

  霍乱和副霍乱是严重的传染病,快速诊断才能及早防治。取病人粪便标本直接涂片荧光抗体染色检查,与常规培养法比较,具有快速特异和检出率很高的优点。尤其适用于急性期病人的诊断。

  四、鼠疫杆菌的快速检查法

  鼠疫是烈性传染病,快速及时的诊断对于控制流行和救治病人有决定性意义,免疫荧光快速诊断方法是一种特异和敏感的手段。直接法和间接都可应用,以直接法更简便。

  五、炭疽杆菌的快速检查法

  炭疽也是一种烈性传染病,早期快速诊断对救治病人有决定性意义。免疫荧光检查方法对炭疽杆菌的检出率很高。应用抗夹膜荧光抗体检查炭疽杆菌有十分确定的诊断意义。也可用间接法检测血清中抗夹膜抗体。

  六、致病性大肠杆菌的快速检查法

  (1)制备当地常见的致病性大肠杆菌荧光抗体。

  (2)取病人大便标本或直肠拭子以生理盐水搅和涂片,晾干,火焰固定。

  (3)直接法免疫荧光染色,立即荧光显微镜检查。

  由于本菌较其他非致病性大肠杆菌组有特殊的抗原,不易发生强交叉反应。所以,在儿童肠炎和引起人群暴发性肠炎时更准确、快速和简便。

  七、结核杆菌的快速诊断方法

  结核杆菌感染机体后可以诱导产生抗体,可用间接法检查血、胸腹水和脑脊液中的抗体。

  也可用抗结核杆菌的荧光抗体直接法检查抗原。

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