十、胃壁细胞抗体（Gastric parietal cell antibodies, PCA)的检测

　　Taylor等（1962)和Iruine等（1962)同一年发现PCA，以恶性贫血病人血清中阳性率最高（90%～100%)。慢性萎缩性胃炎国外报告阳性率20%～60%，伴有恶性贫血者可达90%。其次，甲状腺疾病，糖尿病、肾上腺皮质机能减退及缺铁性贫血等疾病，常伴有PCA阳性。我国恶性贫血发病率低，PCA阳性率在15%～25%之间，正常人2%～5%，60岁以上可高些（16%)。Strickland等（1973)称PCA阳性萎缩性胃炎为A型胃炎，胃窦炎的发病率低，大部分为胃体广泛性萎缩病变，发展后果为恶性贫血。B型患者PCA阴性，胃窦炎的发病率高，胃体部仅有局限性萎缩病变。各种疾病PCA检出阳性率见表15-7。

表15-7 各种疾病PCA检出阳性率

　　Odger等（1968)发现恶性贫血病人胃粘膜内含IgA细胞减少到正常的10%，IgM细胞减至50%，而IgG细胞则增加至15%，后者选择性的出现在残余的壁细胞周围。Baur等（1968)用人胃粘膜匀浆中微粒体部分标记荧光素和9例恶性贫血病人胃粘膜切片反应，其中7例PCA阳性者的胃粘膜因有层见特异性吸附荧光的浆细胞，证实PCA是炎性浸润的浆细胞所产生。

　　十一、胃泌素细胞抗体（Gastrin Cell antibodies, GCA)的检测

　　慢性表浅性胃炎病人有33%血清中GCA阳性，慢性萎缩性胃炎病人也有32%阳性。提示慢性表浅性胃炎与慢性萎缩性胃炎可能是相同本质的病变，可能有着共同的自身免疫反应的背景和发病基础。

　　GCA的检查方法，杀死雄性小白鼠后立即取胃窦组织，固定于4%MFF液中3天（MFF液的配法：在60^℃的蒸馏水25ml中加入4g多聚甲醛，加4滴1N NaOH，再用NaOH或Na₂HPO₄调ph 至7.4后，再加入0.1mol/l PB Ph7.4 25ml)。组织脱水后，用56^℃石蜡包埋，切片3～5μm。56^℃烤干，脱蜡至水洗，取病人血清滴加在切片上，37℃45min，用常规间接免疫荧光法染色。荧光显微镜观察，可见G细胞浆呈黄绿色荧光，即是GCA阳性。

　　十二、胰岛细胞抗体（Islet cell antibady, ICAb)的检测

　　Bottazzzo（1974)用人胰腺，近年有人用兔胰腺的冰冻或石蜡切片抗原，间接免疫荧光法检测糖尿病人血清中有ICAb，发现约在60%～70%的新诊断的胰岛素依赖型糖尿病（IDDM)病人不论年龄大小，其ICAb均呈阳性。ICAb对胰岛四种细胞均起反应，一般是暂时性的。只有约20%或更少的ICAb阳性者可持续2～5年。而单纯饮食控制的非胰岛素依赖型糖尿病阳性率很低，和对照组相似（约0.05%)。在IDDM病人中，有85%的糖尿病人于症状发作后，立即出现ICAb，并随病程的持续而减少。Leudrum等（1976)报告用间接免疫荧光细胞化学发现ICAb在依赖胰岛素的糖尿病人中阳性率为38%（319/829)。而非依赖胰岛素的糖尿病人中阳性率只有1.7%（3/177)是ICAb阳性。

　　ICAb是针对胰岛细胞细胞质成份的抗体，或许是在症状发生之前，紧接着细胞损害而出现的。提示IDDM的发病可能具有自身免疫反应的免疫病理机理。

　　十三、抗肾小球和肺泡基底膜抗体的检测

　　免疫病理证明基底膜抗体是引起肺出血肾综合征即Goodpasture symdrome的主要病因。需要取病人的痛和肺穿刺活检组织，作冰冻切片，用直接免疫荧光细胞化学方法检测Igg ，IgM和C₃等在基底膜上沉着的情况。在肾小球和肺组织基底膜上呈线形荧光分布。在人急性肾小球肾炎中可见呈线形荧光，而膜性肾小球肾炎中，抗原抗体复合物沿肾小球基底膜呈结节　状沉积，藉以诊断和鉴别诊断。

　　1．抗原切片　　取病人肾穿刺或肺穿刺组织，作冰冻切片，厚4～6μm，不固定。肾切片应先在显微镜下选取有肾小球的用作免疫荧光染色。

　　2．直接法免疫荧光细胞化学染色方法分别用抗人IgG、IgA、IgM和补体C₃荧光抗体染色。同时作对照试验。

　　3．荧光显微镜检查肺出血肾综合征病人的肺泡基底膜，肾小球基底膜上都呈现明亮的线形荧光。主要是IgG类抗体，补体C₃荧光也呈线形，沿基底膜线形弥散分布。

　　十四、抗皮肤成分自身抗体的检测

　　抗皮肤成分的自身抗体在疱疹性皮肤病中具有诊断和鉴别诊断意义，寻常性天疱疮具有鳞状上皮细胞间隙抗体，类天疱疮具有基底膜带抗体。这种自身抗体无种属特异性。用直接免疫荧光法检测皮肤活检组织，间接法可用以检测病人血清中的抗皮肤成分抗体。

　　1．抗原切片直接法免疫荧光细胞化学检查，可以取病人皮肤活检组织作冰冻切片。

　　间接法检查常用大白鼠，豚鼠的食道上1/3部分作冰冻切片。也有人曾用猴、人、小白鼠和兔的食道上皮组织，人的正常皮肤，大白鼠、猴、豚鼠和兔唇和舌等作冰冻切片。认为人正常皮肤，小白鼠食道和大白鼠舌，可作为常用抗原，材料来源方便，经济，易推广应用。

　　2．免疫荧光细胞化学染色方法

　　（1)直接法：取病人皮肤活检组织一部分作常规石蜡切片，HE染色，作常规病理组织学诊断，一部分作冰冻切片的直接法免疫荧光染色。荧光抗体用抗人IgG、IgA、IgM和补体C₃分别染切片。同时作对照试验。

　　（2)间接法：用病人血清与食道等抗原切片反应后，分别用抗人IgG、IgA、IgM荧光抗体染色阳性结果，可以进一步作滴度检测。同时作对照试验。

　　3．荧光显微镜检查直接法检测结果可见疱疹性皮肤病中各有一定的荧光形态，可见免疫球蛋白的沉积。

　　刘荣卿等（1987)用直接免疫荧光组织化学方法，对临床拟诊为天疱疮或大疱性类天疱疮病例进行检查，活检取病变附“正常”皮肤标本，用羊抗人IgG、IgM、IgA及C₃荧光抗体染色，结果可见天疱疮9例中，取自“正常”组织标本均见表皮细胞间有IgG沉积，1例并有IgM、IgA，2例有C₃，7例毛囊上皮和（或)汗腺上皮细胞间有IgG、IgM、IgA、C₃沉积。用间接免疫荧光检测8例均阳性，大疱性类天疱疮8例中，取自“正常”皮肤标本均阳性，主要为基底膜出现IgG（7例)，C₃（8例)，1例为IgM，1例伴有IgA。天疱疮及大疱性类天疱疮均为自身免疫性疾病，皮肤及血液中分别存在抗表皮细胞表面抗体、天疱疮抗体及抗基底膜抗体-类天疱疮抗体，这些自身抗体结合在皮肤、粘膜的相应部位。

　　不同疱疮性皮肤病的间接荧光图形如表15-8

　　表15-8 皮肤抗体阳性荧光分布

　　（Clinical Immunology P146, 1971)

　　十五、唾液腺外分泌导管上皮自身抗体的检测

　　在诊断Sjogren’s综合征时检测唾液腺外分泌导管上皮细胞抗体具有重要意义，阳性率达65%，用人或猴唾液腺组织（O型)不固定的冰冻切片，间接免疫荧光细胞化学法检测，可见导管上皮细胞浆呈黄绿色荧光。

　　十六、抗横纹肌自身抗体的检测

　　抗横纹肌自身抗体出现在50%以上的肌无力症和胸腺瘤病人，正常人未发现。属IgG类抗体，用间接免疫荧光法检测此抗体，准确简便。

　　1．抗原切片取人或大白鼠骨骼肌，沿肌纤维平行方向作冰冻切片，不固定。

　　2．间接法免疫荧光染色方法染色的方法步骤与其他自身抗体间接法相同，但在荧光抗体染色之后，要延长PBS洗涤时间，3次PBS洗涤，每次30min。封裱切片。

　　3．荧光显微镜检查可见横纹肌A-带呈阳性荧光，无例外的都是胸腺肿瘤病人。单纯肌无力病人主要与I带和H带呈现阳性荧光有关。某些肌无力病人血清只含与“白纤维反应抗体，另一些只含有与”红纤维反应的抗体，呈斑点状荧光。横纹肌抗体和胸腺髓细胞、心肌呈一定程度的交叉反应。当血清稀释至1：60时，可获得更清晰的横纹荧光图像。

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