（4)将硅化玻璃球高压消毒，冲洗和平衡后将悬浮液过柱，得到的细胞液直接计数。也可以用淋巴细胞分离液提取，用台盼蓝测定其活性，并加10%FCS-RPMI细胞培养液，淋巴细胞数应达5×106/ml。
（5)试管内加0.1ml细胞液后加OKT系列单抗0.1ml，同时用另一试管加0.1mlPBS作对照。混合液在4℃放置30～60min（也可以在冰箱过夜)后，PBS（含RPMI)冲洗3次，离心后细胞沉淀物再加PBS至0.1ml。
（6)加0.1mlFITC标记的抗鼠IgG（根据工作效价)，4℃放置20～30min，PBS洗3次，离心后加在红细胞计数板上，荧光显微镜观察。
（7)阳性细胞为细胞膜上有绿色荧光，有的呈颗粒样，随细胞滚动。荧光镜下可计算200个淋巴细胞中阳性细胞所占的百分率，或根据血细胞计数板中阳性细胞算出细胞总数及百分率。
三、临床意义
1．IEL在胃肠道粘膜中起重要免疫屏障作用正常成人空肠100个上皮细胞有20个IEL，回肠有13个，结肠只有5个，这也可能是恶性肿瘤不发生在小肠的重要因素之一。我们发现胃粘膜也有IEL。在胃部炎症和溃疡时，上皮及腺体隐窝细胞间的IEL明显增加。IEL不但参与免疫反应，而且通过伪足与上皮细胞接触，加速上皮细胞再生。电镜下胃粘膜也发现这种现象。IEL与乳糜泻（coeliac disease, CD)关系最密切。近期研究表明，第12型腺病毒与麦胶蛋白有同源性。CD病人肠道感染这种病毒后，服用麦胶数小时粘膜中IEL显著增加。在上皮细胞HLAII抗原糖蛋白分子作用下与TCR结合，激活TCRαβlEL，发挥细胞毒作用，导致肠粘膜萎缩，引起脂肪吸收不良和腹泻等一系列临床症状。增加的TCRγδIEL调节 TCRαβ的杀伤作用。停服含麦胶食物后，TCRαβIEL明显减少，上皮细胞再生恢复，临床症状消失。CD病人出现疣状胃炎也是IEL参与的免疫反应结果。CD病人的肠道淋巴瘤也是来自IEL增殖。器官移植后的宿主排异反应、结肠炎、热带性腹泻、牛奶过敏和某些自身免疫性疾病均有IEL增加。也有人发现克隆氏病和溃疡性结肠炎患者结肠IEL细胞毒性作用明显减弱。当然，IEL增加是继发或是原发，是否IEL是这些疾病的病因，临床治疗和诊断价值如何，还不清楚。而且IEL受年龄、抗原、免疫调节 剂（考的松对IEL无影响，环磷酰胺显著降低IEL数量)等因素影响，因此需要深入进行研究。
2．粘膜固有层T淋巴细胞在局部体液免疫中起重要调节 作用在GALT中有开关性T淋巴细胞使生发中心的淋巴母细胞转化成IgA产生细胞。这些细胞减少或功能缺乏可导致免疫球蛋白A缺乏。有人分离出克隆氏病和溃疡性结肠炎病人固有层T淋巴细胞进行研究，发现辅助性T淋巴细胞减少，抑制性T淋巴细胞显著增加，可能导致局部免疫失调，引起细胞毒性或迟发性过敏反应等，致使炎症和溃疡发生。
3．胃肠道肿瘤细胞中T淋巴细胞研究倍受重视我们及国内外一些报道均证明胃癌组织中T淋巴细胞显著增加，且其细胞毒性大于非癌组织。胃癌病人周围血T淋巴细胞毒性低于粘膜T淋巴细胞。但有人发现胃癌组织中T淋巴细胞的ADCC作用较弱。提示粘膜T淋巴细胞可能直接通过细胞毒作用或通过释放淋巴因子对癌细胞有杀伤作用。近年来有人将癌组织中提取和分离出具有细胞毒作用T淋巴细胞，体外加入IL-2，促其增殖，再注入病人体内进行治疗，取得明显疗效。
4．上皮细胞的MHC表达也与临床疾病密切相关有人发现克隆病、溃疡性结肠炎、放射性和感染性结肠炎和结节 病性肠炎患者小肠和结肠HLA-DR明显增加，而且不成熟的腺体隐窝细胞也有表达。CD急性期和复发时HLA-DR表达明显增加，缓解期明显减少或恢复正常，说明MHC的固有性和变易性所导致的免疫反应的复杂性，在消化道疾病的发生和发展中起着重要调节作用。
