三、追踪神经束的行径及其投射区
免疫细胞化学技术的引入，使神经解剖学追踪神经束的行径及其投射区的研究方法从单纯的采用损毁核团或压榨、切断神经不引起溃变，然后用镀银或其它染色法观察溃变的神经细胞体和末梢这一传统的技术中解脱出来。与70年代的HRP技术和放射性自显影术相比，免疫细胞化学技术不但能追踪神经束的行径及其投射区，而且可以定性，确定神经细胞核团或神经束所含神经递质的种类。量单纯用免疫组化染色在连续切片上追踪，常不能获满意结果，因为神经组织的多肽含量较低，在免疫组化染色的连续切片追踪过程中常有丢失的可能。故现在普遍采用的是免疫细胞化学技术与其它技术相结合的“杂交技术”，如与HRP、荧光物和放射自显影技术等相结合的逆行或顺行标记法、与AChe 和单胺荧光组织化学技术相结合的多重染色法等。Westlund1983年应用DβH抗血清注入脊髓，经轴浆运输到胞体，证明脑桥的NA能神经细胞群是脊髓内NA能神经纤维和终末的唯一来源。利用免疫荧光与荧光素进行标记相结合的方法，Mathy 和Hunt查清了过去一直了解得不太清楚的内脏感觉和味觉的传入径路，证明在内脏感觉和味觉由周围感受器传导至感觉皮质，中继部位在延髓的孤束核，脑桥的解剖学工作者还发现用麦胚凝集素（WGA)或霍乱毒素（Cholera Toxin)结合的HRP（CT—HRp )，在神经束行径追踪方面，较游离的HRP灵敏数10乃至100倍以上，因为结合的HRP是通过受体介导而被神经元摄入的。万选才等的研究工作表明CT-HRP较之单纯的HRP在显示树突终末状结构方面有很高的灵敏性。结合HRP的优点可归结为四点：①灵敏度高；②剂量低微；③充分、恒定地显示轴突、树突顺行（离胞体)标记；④降解时间长。以古老的切断神经或损毁神经细胞核团的研究方法与免疫细胞化学技术相结合以追踪神经细胞的起源仍在沿用，如Hokfelt在研究小肠SOM免疫反应性神经的来源时发现，切除肠系膜神经后，小肠SOM免疫反应性神经减少，而结扎肠系膜神经后DβH和SOM免疫反应物在结扎的神经近端聚集，说明小肠的DβH和SOM主要是通过肠系膜神经传运来肠壁的。也可采用化学神经阻断剂如6—羟多巴胺（6--OHDA)、红辣椒素（Capsaicin)等代替手术切断，与免疫细胞化学技术结合应用探寻神经束的行径和反射。
总之，免疫免疫化学技术的应用，使能在中枢较前更迅速、准确地显示了一些神经束的行径、神经细胞核团的定位和定性以及外周器官神经纤维的来源等。
四、区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞
免疫细胞化学的发展进一步揭示了神经组织成分的特殊化学性质，利用这些特征不仅能区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞，而且可进一步区分不同的神经胶质细胞。S—100是一种从脑组织提取出来的酶性蛋白，是钙结合蛋白的一种，它主要存在于神经胶质细胞、周围神经的雪旺氏细胞、交感神经节 中的卫星细胞和肠肌间神经丛的肠胶质细胞（Entericglial cell)。S—100 也可用于人类肿瘤组织发生的分类，如星形胶质细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤雪旺氏细胞瘤显示S—100免疫反应阳性而脑膜瘤和髓母细胞瘤为阴性反应。神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specific Enolase, NSE)是从脑组织分离出的一种酸性可溶性蛋白，是烯醇酶的同工酶之一。NSE是神经元特异性蛋白质，存在于神经细胞和APUD系统的神经内分泌细胞中，可作为神经元和神经内分泌细胞的标志酶，在星形胶质细胞瘤、脑室管膜瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤和雪旺氏细胞瘤中，NSE呈免疫反应阴性，而神经母细胞瘤为NSe 免疫反应阳性。皮肤的Marker细胞，细胞学分类归属不明，经NSE免疫染色反应呈阳性结果，结合电镜观察证明在该类细胞中含有致密核心的大囊泡，属APUD系统的神经内分泌细胞。在APUD系统的其它细胞如垂体前叶中肽类细胞、肾上腺髓质细胞等以及APUD瘤中，NSE均呈阳性反应。NSE又是神经元分化的标志酶，可以用以研究体内、外神经元的分化发育过程。
近来，免疫细胞化学工作者又利用各种细胞中所含中间丝提纯制成特异性的单克隆抗体血清用于细胞学归属和病理学的检测。这些中间丝包括：①上皮细胞或上皮源细胞中的前角质蛋白（Prekeratin)或称细胞角质蛋白（cytokeratin)；②心肌、平滑肌或骨骼肌细胞中的结蛋白（Desmin)；③间质细胞或间充质细胞中的波形微丝（Vimentin)；④神经胶质细胞中的胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillory Acidic Protein, GFAP)；⑤神经细胞中的神经微丝（Neurofilament, NF)等（详见第十二章 )。实验证明，GFAP是星形胶质细胞特异性标志蛋白，具有星形胶质细胞分化潜能的肿瘤如髓母细胞瘤也含有GFAP，而少突胶质细胞和小胶质细胞呈阴性反应。肠道肌间神经丝内胶质细胞原来细胞学分类归类不明，经GFAP染色呈阳性反应，说明其中与中枢星形胶质细胞属于同一细胞学范畴。O1—O4抗原和半乳糖脑苷脂（Galactocerebroside)只存在于少突胶质细胞，griffonia simplicifloia凝集素仅对小胶质细胞呈阳性反应（小胶质细胞膜上有2—d –半乳糖)。据此，可区分不同类型的神经胶质细胞。
总之，免疫细胞化学技术的发展，解决了过去依赖Nissl 、Cajal和Golgi等传统的神经组织染色法所不能完全解决的问题。进一步揭示了神经细胞的特殊化学性质，现在神经组织内已证实的物质包括蛋白质、肽类、酶类、神经递质和胺等不下50余种，其中神经系统的特异性蛋白质有20余种，与神经元有关的除NSE外，还有神经微丝蛋白，微管蛋白，碱性蛋白（只存在于大脑神经元内的一种组蛋白)和只存在于嗅球神经元中的嗅球蛋白等；与神经胶质有关的有：神经收缩蛋白、小泡蛋白、突触蛋白（Synaptin)、GP350和D1、D2、D3等，为进一步研究神经细胞、神经胶质细胞、神经内分泌细胞及其结构成分提供了有力的手段。
