2．艾滋病以及HLTV—III感染艾滋病是一种由人类T淋巴细胞病毒（HLTV--III)感染而造成的疾病。这种病毒主要侵袭CD₄⁺T细胞，而导致CD₄淋巴细胞减少，CD₄/CD₈淋巴细胞比值下降，甚至可低到0.5以下。艾滋病多发生在同性恋性行为活跃的男性，这可能与多次重复感染HLTV-III有关。对异性性行为活跃的人来讲，对HLTV—IIi 感染的机会也不容忽视。另一种感染的途径是HLTV血清阳性的献血者对受血者的感染。有部分人血液中T淋巴细胞减少，CD₄/CD₈比值下降，但HTLV血清反应不一定就是阳性。有些人CD₄减少不明显，但CD₈有所增加，也会导致CD₄/CD₈的的比值下降。

　　对可疑为艾滋病及血清检验为阳性的人，T细胞亚群是分析了解免疫系统被病毒破坏程度的标志。初诊时，CD₄细胞越少，CD₄/CD₈值越低者，预后越差。所以经治疗后恢复的指标则是CD₄细胞数增加，CD₄/CD₈比值升高。用荧光标记双染色的FCM分析的结果表明，艾滋病人除CD₄和CD₈的改变外，同时还可以表现出OKT₁₀阳性细胞增多（图10-15)。病人表现为CD₈和OKT₁₀同时增加时，预后比OKT₁₀阳性细胞低的病情严重。

图10-15　健康人艾滋病人淋巴细胞表面抗原的比较

艾滋病人Leu₃⁺、Leu₈^-和Leu₃⁺、Leu₈⁺细胞均减少，而Leu₂⁺、Leu₈^-细胞相应增加，

Leu₂⁺、Leu₇⁺与Leu2₃⁺、Leu₁₀⁺细胞明显增加

　　3．白血病和淋巴瘤的表现型　近年来，为了弄清这些肿瘤的病理组织形态、影响治疗效果的原因与免疫状态的相互关系，对于不同类型的白血病和淋巴瘤作为广泛的细胞表面表现型的研究。

　　在诊断方面，FCM与单克隆抗体结合，可以弄清这些肿瘤的免疫起源，特别是分清B细胞性、T细胞性或骨髓性肿瘤。同时，还可以证实一些与细胞起源相关的抗原，如普通急性淋巴细胞性白血病抗原（CALLA、CD₁₀)。另外，可以用适当的试剂从反应免疫过程中来证实单克隆的肿瘤细胞的增殖。

　　大部分淋巴系统肿瘤均起源于B细胞。而B细胞肿瘤常用抗免疫球蛋白的抗体来证实。由于前B细胞与浆细胞表面均无免疫蛋白，所以用检测免疫球蛋白的办法就只能证实B细胞发育中间时期的肿瘤。目前，已有一系列的B细胞表面抗原被发现，而可以证实B细胞个体发育的各个时期的肿瘤。

　　对B细胞肿瘤最有价值的抗原是CALLA。这种抗原仅存在于B细胞正常以育期的前B细胞、早期B细胞以及80%～90%的急性淋巴细胞性白血病。因此，抗CALLA抗体可以区别淋巴细胞性和髓性白血病。用抗CALLA结合其它一些成熟B细胞的单克隆抗体，如CD₁₉，CD₂₀，CD₂₄（B₄，B₁，BA_-1)将能证实大部分B细胞来源的肿瘤。图10-16给出了B细胞分化的各个时期细胞膜的表现型。来源于B细胞的肿瘤和正常B细胞的表现型相似，也就是说，B细胞前身、成熟B细胞及最后分化为分泌B细胞—浆细胞。

图10-16　B细胞分化各时期的细胞膜表现型

　　由于T淋巴细胞来源的肿瘤浸润性较强，预后较差，并需要多种治疗。T细胞肿瘤的表现型千变万化，但大部分均表现T细胞抗原CD₇（Leu₉,3A)或其它T细胞抗原CD₂、CD₅（OKT₁₁，OKT₁)。这些抗原与肿瘤的细胞成熟时间有关，因而有助于拟定治疗方案。从FCM分析的结果表明，非成熟的T细胞肿瘤常表现非成熟的T细胞抗原，如CD₁和t ₁₀。而成熟的T 细胞肿瘤则仅表现成熟T细胞抗原：CD₂、CD₃、CD₅和CD₇。有时也可表现CD₂、CD₈，但不会出现在同一个细胞上面。

　　由于肿瘤细胞的多种来源，很难避免在肿瘤标本中混杂正常细胞，这给FCM的分析带来技术上的困难。如残留的红细胞在FCM分析时，落入淋巴细胞框定的范围内而造成淋巴细胞各种亚群百分率下降。所以在制备标本时，应尽量想法去除红细胞。另一种污染是正常细胞存在于肿瘤细胞之间，这是一个很头痛的问题。例如骨髓常被外周血污染，反应性的正常淋巴细胞渗入到肿瘤组织中等，因此估计污染程度对解释FCM分析的资料有一定的意义。因为在FCM分析时，正常细胞与肿瘤细胞可能由于不同的体积和密度而被分开，根据对污染的估计，仔细分析图像就能得到比较正确的结果。

　　4．FCM对正常B细胞和B细胞肿瘤分析　　FCM对正常B细胞和B细胞肿瘤的分析在免疫学研究和临床诊断上有着重要的实用价值，B细胞的某些特征必须使用FCM来分析，但是这在FCM技术方法中仍存在着一些需要解决的问题。

　　（1)B细胞的标记：B细胞膜表现免疫球蛋白（SIg)存在于所有成熟B细胞。最早的B细胞前身，细胞质内含有免疫球蛋白M（IgM)，但不存在于细胞膜表面。细胞质内IgM的证实以及同时测定细胞表面的SIg，对FCM是很困难的，当然今后可能会用双染法来解决这样的难题。大部分成熟B细胞具有SIgM和SIgD，少量具有SIgG和SIgA，当然这也可能是因为不同的亚群的缘故。但仅以Ig的重链来分类B细胞是不可靠的，因为B细胞可以从膜表面的IgM逐渐转变成IgG，因而从重链着手无法把B细胞分类。大部分B细胞肿瘤也表现出带有SIgM和SigD。随着B细胞逐渐转变成浆细胞，膜表面Ig 逐渐丧失，在细胞质内又出现大量的免疫球蛋白。

　　与重链相反，B细胞的整个发生期只有一种k或者λ轻链，B细胞肿瘤克隆仅表现一种轻链，因此通过在FCM上显示的不平衡的轻链表现可以确定B细胞肿瘤。测定方法见（3)。

　　用SIg的最大缺点是它的“嗜细胞性”，因为正常B细胞、自然杀伤细胞（NK)、激活T细胞以及所有巨噬细胞均有Fc段受体，因而可以不同程度地与抗SIg单克隆抗体的Fc段结合而产生非特异性的结果，因此选择抗体时，应使用已被胃蛋白酶消化过的、Fc段也被去除的、仅留下来的F（ab’)₂。

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