（2)FCM测定B细胞的临床指证：

　　①免疫缺陷；免疫缺陷可以是先天性或获得性的。低丙种球蛋白白血症和无丙种球蛋白白血症常伴有免疫球蛋白分泌的紊乱，因此有必要分析B细胞。

　　②淋巴瘤：非何杰金氏病的淋巴病，80%来源于B细胞。因而一旦怀疑为淋巴瘤，就应仔细用FCM对B细胞的表现型进行分析，可以分析血、骨髓、以及活检淋巴结等。首先确定肿瘤细胞的来源：B细胞性（CD₂₀⁺，SIg⁺)或T细胞性（CD₃⁺)。也有可能某些淋巴病来源于单核细胞（CD₁₁⁺)成裸细胞而表现出非T非B。一旦确立为B细胞来源后，就应更进一步分析克隆增殖的性质：单克隆、少克隆、或是多克降珠。单克隆性的增殖往往是肿瘤的标志。可以用SIg的轻链和重链分别加以测试，往往轻链比重链更有价值。在不久的将来，或许可以直接用免疫球蛋白的基本加以鉴别。

　　对B细胞亚群的确定，目前并未定论，但某些B细胞被CD₅（T₁，OKT₁)染色。正常B细胞中这些细胞较少，而多见于慢性淋巴性白血病和骨髓移植后的免疫缺陷时期。在B细胞的肿瘤病人中，10%的也可以出现CD₂₀（B₁)阴性反应，这是B细胞成熟而将分化为浆细胞的标志。在异常B细胞上，往往有一些B细胞的标记缺失或其它表现型出现，因而对异常B细胞的FCM的分析尤为重要。图10-17显示CD₁₉—FITc （B细胞)和CD₅-PE（T细胞)双染色的假三维图像分析。X轴为绿色荧光的Leu₁₂(B细胞)，Y轴为红色荧光的PE—Leu₁(T细胞)。从图中可见，有较多的细胞表现出Leu₁₂⁺t Leu₁⁺,阴性区内为NK细胞和红细胞等。

图10-17　异常B细胞双染色的假三维图

　　（3)k-λ测定B细胞克隆：k、λ测定法是一种从正常B细胞中测定少量B细胞克隆生长的方法。其基本原理是：若有B细胞克隆存在，将改变某一种轻链（k或λ)的荧光强度的分布。若轻链为k的B细胞生长，则抗k的抗体能测试出这种变化，而抗λ的抗体的测试没有任何改变。正常情况下，B细胞的k和λ的荧光强度分布是一致的（见图10-18)。

图10-18　k-λ克隆的测定

正常情况，B细胞轻链分布图像，一致κ和λ的波形没有区别。但在异常时，若有单克隆生长，κ链有分布则与λ不一致，在总和的曲线形态上也会产生差异。

　　在实际应用中，血液、体液、组织细胞的悬浮液效果均较好，而对于骨髓，大量细胞的非特异性标记会影响测定的结果。这里面必须强调，正常B细胞中的克隆细胞生长并不意味着它们必然是肿瘤细胞，还必须结合其它指标再做结论。不过这种方法对确定肿瘤细胞的存在、细胞发育阶段、以及经治疗后病情控制的状况等，都可以提供一些有用的资料。

　　以上仅限于从外周血的白细胞分析这一侧面介绍了FCM的某些疾病中的临床应用。其实，它也仅只是问题的一个部分。例如，有研究工作表明：CD₃₄抗原在由红系、巨核系、粒系和巨噬细胞三个细胞成株单元组成的成株细胞中有所表现。CD₃₄⁺细胞在人的骨髓细胞中约占1～4%，而在外周血中却探测不到。又如，NK细胞近来被认为可能和人类的某些疾病的发病机理有关，对NK细胞的测量可以作为免疫治疗的免疫监测的重要参数和有效的预后征状的指示。以前是用放射性的⁵¹Cr的释放来检测NK敏感的靶细胞的毒理学活性从而评估NK的功能的，而采用荧光探针CFDA（car－boxy—fluorescein diacetate)标记则可用FCM技术更为安全可靠地进行测定。有报告指出，健康男人的数值为（67.1±22.7%)%，健康女人为（63.9±20.0%)；患有妇科癌肿病人则为（38.5±23.1)%,明显偏低。这些工作表明，FCM的技术从免疫组织化学角度还会有所发展。在第二节　我们曾简单介绍了流式细胞分析技术在生物医学工程中应用的一些技术途径，这也可以启发我们借助于FCM来提高免疫组织化学的分析能力。可以预见，FCM一定会成为免疫组织化学的一项重要的技术工具，并将在医学科研和临床应用中发挥更大的作用。

　　附【美国Becton –Dickinson 公司可提供的FCM标准】荧光微球（Fluorescent beads)；鸡红细胞核（Chicken erythrocyte nu－clei)和小牛胸腺细胞核（Calf thymocyte nuclei)，用于DNA测量的质量控制；单克隆抗体试剂；以及用于免疫表型（immunopheno－typing)和其它临床应用的药盒。

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