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 医学全在线 > 理论教学 > 基础学科 > 免疫细胞与核酸分子杂交 > 正文
免疫细胞化学与图像分析
来源:医学全在线 更新:2007/12/3 字体:

 

  读者需注意的是:若特征物是各向同性分布,可采用任意方向的随机切片。若特征物呈各向异性分布,可采用垂直切片或其他一些方法制作的切片。Mattfeldt等曾提出在一个组织块中作三个互相垂直的切片(three mutually perpendiculer sections )用作研究。目前通用的垂直切片的概念是1986年Baddeley等人提出,指垂直于某任意确定的水平面的随机切片,或平行于某一任意确定的垂直轴的随机切片。如图9-8所示,HP为水平面(horizontal plane),VP为垂直面(vertical planes),二个垂直面互相不是平行关系,成一定角度。在生物组织中,如皮肤的表皮、各种上皮的外表面均可作为水平面,只要与水平面垂直的各个方向所切的切片均为垂直切片。骨骼肌纤维的长轴、长骨的长轴均可作为垂直轴,与其平行的切片也作为垂直切片。管状的器官如消化管、呼吸管道等,可纵向剖开,展平,当作水平面,在其中作垂直切片如图9-9所示:以水平面为基准,垂直切片必需在随机的位置和随机的方向,在标本计划中,第一步是需要随机,常用一组系统随机位置的垂直切片(systematic randomly positioned vertical sections),第一个切面是随机的,其余切面则是与第一个切面或一定的角度而选择的,如图中(3)和(4)即表示三个不同的方向,但都垂直于同平面,即垂直切片互相间有一定的旋转角度。图9-7摆线测格中大箭头所示vertical 表示箭头方向与标本垂直轴一致,即图9-8中的verfical 所示方向。

  如果有的标本没有可辨认的垂直轴,可任意确定一个水平面,来作垂直切片。

图9-7 示摆线测格

9-8 示垂直切片

VERTICAL:指垂直轴;

  P:水平面;二个VP为垂直面,互相不呈平行关系

图9-9 示管状器官的垂直切片

  六、实例介绍

  因为将免疫细胞化学方法与图像分析结合起来进行研究的论文在国内国外都还不多。在第六届国际学术会议上发表的90多篇论文中只有1篇,因此在实例介绍中,包括一部分不是免疫细胞化学方法,而是用其他组织学方法与图像分析结合起来研究,但这种方法对研究免疫细胞化学标本也可借鉴,从中可得到一些启发的,也在此选择性地作一些介绍。

  Mcmillan等1983年在第六届国际体视学会议上曾报告了“用图像信息处理机客观评定免疫组织化学染色的组织”,阐明了当组织与第一抗体作用时,不断搅动血清,明显提高了免疫反应。Bordier 等1982年用图像分析法对大鼠的神经垂体进行研究,阐明了轴突占神经垂体体积的一半,分泌颗粒占轴突体积的20%,加压素的含量与分泌颗粒的体积密度无关,而与分泌颗粒内激素浓度有关。这些结果如不用图像分析法是很难得出的。Steward等1983年用测量家鸡脑单位面积内的突触数目等,来研究与记忆形成有关的细胞学改变。

  英国现在有300万75岁以上的人,其中有五十万人患有老年性痴呆(Alzheimer病),这种病过去认为是由于年龄增长的不可避免的现象。英国神经科学所用图像分析仪与谷氨酸盐受体的放射自显影法结合起来对此病进行了重要的研究。由于放射自显影会产生一些非特异性的结合,用图像分析仪可以从全结合图像减去非特异性结合图像,而得到特异性结合图像,可以测出特异性结合的百分率。目前已知道,老年性痴呆患者脑中,与记忆、理性行为及感情行为有关的区域内,神经元的进行性退变,神经递质发生改变,影响了从一个神经元到另一个神经元的信息传递。

  我国1991年11月出版的“计量学在形态学研究中应用学术研讨会论文集“共收集论文123篇,其中有关免疫细胞化学与计量学结合的论文共8篇:①大鼠烫伤后下丘脑室旁核和视上核内AVP含量变化的形态学计量(第二军医大学张忠义等)用图像分析仪测定AVP阳性反应物的面积。②人脊神经节 内SP、SK、CGRP免疫反应细胞的比率(中国医科大学方秀斌等),用人工计数方法。③交感神经元和胆碱能神经元中ACh和ChAT显示比较(军事医学科学院汪家政等),用图像分析法测定各种参数。④大鼠脾树状突细胞的组织分布棗S—100蛋白标记和立体计量分析(南京铁道医学院张锦堃等)用目镜标线片的测格进行定量研究。⑤垂体GH腺瘤细胞分泌颗粒的免疫胶体金定位检测及定量分析(中国人民解放军总医院罗毅等),用图像分析法测定各种参数。⑥胃肠粘膜重度异型增生与腺癌细胞核DNA含量的测定及免疫组化的比较研究(上海第二医科大学吴平平等),用显微分光光度系统进行DNA测量。⑦免疫组化在胃癌病理棗生物学分型中的价值(滨州医学院张树毕等),将免疫组化反应分为阳性阴性而进行比较。⑧人胎十二指肠EC细胞的体视学研究(江西医学院朱清仙等)用目镜标线片测格进行定量研究。由此可大致体现我国在此领域的研究现状。

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