荧光抗体是免疫荧光细胞化学的重要技术之一，制备高特异性和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高特异性高效价的免疫血清。
一、荧光素
荧光是指一个分子或原子吸收了给予的能量后即刻引起发光，停止能量供给，发光也瞬时停止（一般持续10-7～10-8s)。可以产生明亮荧光的染料物质，称荧光色素。目前主要常用的荧光色素有以下3种：
（一)异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate, GITC)
呈黄色、橙黄或褐黄色粉末或结晶，性质稳定，在室温下能保存2年以上，在低温中可保存多年。易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490～495nm，最大发射光谱为520～530nm，呈现黄绿色荧光，分子量为398.4（图3-5)。医学 全在.线提供
在碱性条件下，FITC的异硫氰酸基在水溶液中与免疫球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记荧光免疫球蛋白，即荧光抗体。反应式如下（图3-6)：
一个Ig分子上最多能 标记15～20个FITC分子。
图3-5 FITC的吸收光谱和发射光谱
图3-6 抗体的FITC标记反应式
（二)四乙基罗达明（tetraethylrodamine B200, RB200)
呈褐红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光谱为570nm，最大发射光谱为595～600nm,呈明亮橙红色荧光。分子量为580（图3-7)。
RB200在五氯化磷（PCl5)作用下转变成磺酰氯（SO2Cl)，在碱性条件下易与蛋白质的赖氨酸ε-氨基反应结合而标记在蛋白分子上。化学反应式如下（图3-8)。
图3-7 RB200在可见光区的吸收 图3－8 RB200标记抗体反应
光谱和荧光光谱
图3-8 RB200标记抗体反应
