10.RNA酶A(Sigma)
(1)储备液
称取RNA酶A 1g溶于100ml醋酸钠中,置沸水中煮10min,分装后储于-20℃。
(2)工作液
用储备液按1:100稀释。
11.20×SSC
NaCl 175g
柠檬酸三钠 88g
dH2O 1000ml
固定试剂溶解后,dH2O定容至1000ml,调pH至7.4,高压灭菌。
12.杂交液(高深度,HMmix)
去离子甲酰胺 6.0ml
100×Denhardt’s液 1.0ml
50%硫酸葡聚糖 2.0ml
1%人或鲑精DNA※
20×SSC
※:临用前加入,终浓度为100~200μg/ml。
该液为高浓度杂交液, 存于4℃。
13.PBT液
BSA 5%
Triston X-100/(PBS) 0.1%
注:BSA液用前应用Whatman 3mm滤纸过滤。
14.兔抗生物素(α-生物素)单克隆抗体
用PBT液1:100稀释。
该单抗现可从英国Dako公司购得。
15.金(10~20nm)标羊抗兔二抗
用PBT液1:50稀释。
16.银溶液(Janesen)
17.Hoedst 33258(Sigma)
储备液(100×)
Hoedst染料 5mg
甲醇 10ml
工作液:用2×SSC 1:100稀释储备液。