一、杂交前准备
（一)DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。
DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate)，可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸馏水等)中，经猛烈振摇后，于室温静止数小时，然后高压灭菌，以除去降解DEPC（DEPC分解为CO2和乙醇)。有些试剂可直接加入DEPC，终浓度一般为0.1%～0.4%，原则上在杂交及其以前的步骤中，所有液体试剂均需用DEPC处理，或用DEPC水配制，包括乙醇的稀释。此外，接触标本以及标本有关的空中的洗涤也需DEPC水洗涤。
注意：①DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。②含有Tris缓冲液的溶液中，不能加入DEPC。
（二)载玻片的处理
组织原位杂交，常在载玻片上进行，故载玻片的洗涤至关重要，必须保持清洁，并且不能有任何核酸的污染。处理方法如下：
（1)先经洗衣粉浸泡过夜，次日自来水冲洗后，泡酸数小时以上，取出后再用流水冲洗，双蒸水冲洗2～3次，置160℃以上烤箱中烧烤4h以上，或经15磅高压灭菌20min。经以上处理可清除载片上的核酸酶。
（2)HCl处理法
（三)硅化
【方法１】（1)将一扎新的盖玻片散开，在通风条件下于0.1mol/L的HCI中煮20min,等其冷却后,倒掉盐酸。
（2)用去离子水沉漂洗玻片，竖放在架子上自然干燥。
（3)硅化盖玻片：通风条件下，将单块的盖玻片在二甲二氯硅浣（dimethyldichorsilane,DMDC)液中浸几下，竖入在架子上干燥。
（4)收集干燥的盖玻片于一可耐热的petri氏盘（或培养皿)中，用去离子水漂洗数次，彻底清洗。
（5)用铝箔将装有盖玻片的培养皿包好，于180℃烘烤4h过夜。取出待冷至室温后，即可进行后续处理。
附：2%DMDC
配制：按比例两者充分混匀，静止待气泡消失即可使用。
用途：硅化玻片（载片、盖片均可)。
【方法2】将经过洗净的玻璃盖片分散开放在一金属网中，并将该网放入一接有真空泵的干燥器中。同时，在干燥器中放一盛有约1m二甲二氯硅浣（dimethyldiorosilane,DMDC)的小烧杯。盖好干燥器（确保密闭)，抽真空约5min，然后让空气冲入。取出盛有盖片的金属网架，用锡箔纸包埋，于250℃以上烘烤4h以上，最好过夜。冷却后备用。 医学.全.在线.网.站.提供
本法可用于玻璃及塑料器皿的硅化。塑料器皿只能于60℃烧干。
【方法3】APES（氨丙基三乙氧基硅浣)法
【方法4】
（1)49ml氯仿与1mg二甲二氯硅浣（DMDC)配液；
（2)倒入每个拟硅化的试管或离心管中，浸泡5min后用乙醇或重蒸水冲洗；
（3)玻璃器皿使用前位于180℃以上烘烤2h以上，塑料器皿应于60℃烘烤过夜。
注意：DMDC有毒且高度挥发，应于通风环境操作并戴口罩、手套，避免接触皮肤或吸入。
