二、关于探针的标记
(一)cRNA探针的同位素标记
1.标记液(转录标记)
2.转录缓冲液
※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。
3.标记终止液
4.标记探针水解液
先用dH2O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。
5.探针水解时间
注:LO-探针初始长度(kb)
Lf-探针的终长度(kb)
K-0.11kb/min
6.探针水解终止液
每次加入充分混合,临用前配。
7.探针沉淀液
每次加入,充分混合,新鲜配制。
(二)寡聚核苷酸3’端标记(cRNA探针)
1.标记反应液
2.终止液:0.2mol/L EDTA
3.探针沉淀液
(三)cRNA探针非同位素标记(地高辛及生物素)
1.标记液
△:生物素标记时为10mmol/L的生物素-11-UTP
※:为检测标记率而加。
2.转录标记终止液
(1)0.2mol/L EDTA:用于地高辛标记法
(2)生物素标记终止液: