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原位杂交组织化学常用试剂及处理
来源:医学全在线 更新:2007/12/3 字体:

 

  二、关于探针的标记

  (一)cRNA探针的同位素标记

  1.标记液(转录标记)

  2.转录缓冲液

  ※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。

  3.标记终止液

  4.标记探针水解液

  先用dH2O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。

  5.探针水解时间

  注:LO-探针初始长度(kb)

  Lf-探针的终长度(kb)

  K-0.11kb/min

  6.探针水解终止液

  每次加入充分混合,临用前配。

  7.探针沉淀液

  每次加入,充分混合,新鲜配制。

  (二)寡聚核苷酸3’端标记(cRNA探针)

  1.标记反应液

  2.终止液:0.2mol/L EDTA

  3.探针沉淀液

  (三)cRNA探针非同位素标记(地高辛及生物素)

  1.标记液

  △:生物素标记时为10mmol/L的生物素-11-UTP

  ※:为检测标记率而加。

  2.转录标记终止液

  (1)0.2mol/L EDTA:用于地高辛标记法

  (2)生物素标记终止液:

 

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