4．RNA酶溶液

　　取RNA酶A溶解于100ml DEPC水中，分装成小份（1ml,10mg/ml)，-20℃储存。

　　临用前，取RNA酶A储备液，用2×SSC溶解配成工作液（0.01mg/ml).

　　5.0.2%

　　取2ml Triton X-100加入998ml PBS中，充分振荡使其充分混合。

　　七、杂交用液

　　1．SSC（Standard Saline Citrate, SSC)

　　通常配成10×，20×，50×的储备液，如下：

　　配制：先称取上述两种试剂，溶于约800ml ddH₂O中，滴加10N的NaOH，将pH值调至7.0，补足ddH₂O至1000ml，加入终浓度为0.1%～0.2%的DEPC，分装后高压灭菌，可室温保存。

　　该液主要用于配制予杂交液及杂交后的各种洗脱液，以保持一定的离子强度。此外，在用于杂交的湿盒内也常用5×的SSC以保持一定湿度。

　　2．Denhardt’s液

　　通常配成10×，50×或100×的储备液

　　配制：称取上述试剂，溶于800ml左右灭菌ddH₂O中，定容至1000ml后，过滤后于-20℃保存备用。

　　该液用于配制杂交液及予杂交液等。

　　3．杂交液及予杂交液

　　※：临用前加；△予杂交液不加

　　配制：先以去离子甲酰胺与SSC于室温混合，加入硫酸葡聚糖于50℃促溶，依次加入其它成份。硫酸葡聚糖在室温常需数小时才能完全溶解。有时需旋涡振荡。定容后充分混合。根据使用方便可分装（最好用铝箔将瓶子包好)存于4℃，可达数月。注意，杂交缓冲液在使用前切忌污染。

　　变性被打断的无关DNA（常为鲑精DNA或鲱精DNA)可在予杂交及杂交前加入。此外，有许多物质如肝素、多聚腺甘酸、醋酸钠等多种成份，可根据需要加入杂交液中，上述配方所列只是不可缺少的基本成份。

　　配制好的杂交液不宜反复冻融，否则易产生硫酸葡聚糖沉淀现象。使用前最好加热至50℃，使其充分溶解后再加入探针分子。至于探针的浓度视实验目的、探针类型及标记方法而异。通常RNA探针分子浓度为0.5～2μg/ml，DNA探针浓度为1μg/ml,此外，如使用³⁵S标记的探针，还需加入终浓度为100mmol/L的二硫苏糖醇（Dithiothreitol,DTT)至杂交液及杂交后的洗脱液中。

　　八、杂交后漂洗溶液

　　无论用何种标记方法及何种信号显示方法，在杂交后洗脱则是大同小异。在此，归纳几种带有共同性及常用的洗脱液。

　　该液常用于杂交后的初次洗脱，故离子强度（张力)较高。

　　该液常用于杂交后的第二次洗脱，离子强度较低，经过上述两套洗脱液洗后，有的还可用2×SSC，10%（0.1%)SDS洗脱。

　　主要是洗去残留的RNA，降低背景。用于以RNA为探针的原位杂交方法中。

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