（2)夹心法（sandwich assay):将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上)，加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。
间接法（indirecr ELISA)常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体)，再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体)，经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。
（3)BAS-ELISA：近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素（avidin)分子可以结合4个生物素分子（biotin)。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统（biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA)，它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。
表20－1 免疫学测定方法敏感性比较
| 测定方法 | 敏感性（每升) |
| 单向免疫扩散试验 | ＜1～2mg |
| 双向免疫扩散试验 | ＜1mg |
| 火箭电泳 | ＜0.5mg |
| 对流电泳 | ＜0.1mg |
| 免疫电泳 | ＜5～10mg |
| 凝集试验 | 1μg |
| 被动血凝试验 | 1μg |
| 血凝抑制试验 | 0.1μg |
| 补体结合试验 | 0.1μg |
| 放射免疫分析法 | ＜1pg |
| 酶联免疫吸附试验 | ＜1ng |
| 定量免疫荧光分析 | ＜1pg |
