(六)酶解片段
1.本瓜蛋白酶的水解片段 Porter等最早用木瓜蛋白酶(papain)水解兔IgG,从而区划获知了Ig四肽链的基本结构和功能。
(1)裂解部位:IgG铰链区H链链间二硫键近N端侧切断。
(2)裂解片段:共裂解为三个片段:①两个Fab段(抗原结合段,fragment of antigen binding),每个Fab段由一条完整的L链和一条约为1/2的H链组成,Fab段分子量为54kD。一个完整的Fab段可与抗原结合,表现为单价,但不能形成凝集或沉淀反应。Fab中约1/2H链部分称为Fd段,约含225个氨基酸残基,包括VH、CH1和部分铰链区。②一个Fc段(可结晶段,fragment crystallizable),由连接H链二硫键和近羧基端两条约1/2的H链所组成,分子量约50kD。Ig在异种间免疫所具有的抗原性主要存在于Fc段。
图2-6人分泌型IgA和分泌型IgM的局部产生示意图
图2-7 IgM结构示意图
2.胃蛋白酶的水解片段 Nisonoff等最早用胃蛋白酶(pepsin)裂解免疫球蛋白。
(1)裂解部位:铰链区H链链间二硫键近C端切断。
(2)裂解片段:
1)F(ab')2:包括一对完整的L链和由链间二硫键相连一对略大于Fab中Fd的H链,称为Fd',约含235个氨基酸残基,包括VH、VH1和铰链区。F(ab')2具有双价抗体活性,与抗原结合可发生凝集和沉淀反应。双价的F(ab')2与抗原结合的亲合力要大于单价的Fab。由于应用F(ab')2时保持了结合相应抗原的生物学活性,又减少或避免了Fc段抗原性可能引起的副作用,因而在生物制品中有较大的实际应用价值。虽然F(ab')2与抗原结合特性方面同完整的Ig分子一样,但由于缺乏Ig中部分,因此不具备固定补体以及与细胞膜表面Fc受体结合的功能。F(ab')2经还原等处理后,H链间的二硫可发生断裂而形成两个相同的Fab'片段。
2)Fc'可继续被胃蛋白酶水解成更小的片段,失去其生物学活性。
图2-8 Ig酶水解片段示意图
二、免疫球蛋白分子的功能
Ig是体液免疫应答中发挥免疫功能最主要的免疫分子,免疫球蛋白所具有的功能是由其分子中不同功能区的特点所决定的。