本方法采用高效液相色谱法测定环磷酰胺原料药中环磷酰胺的含量。

本方法适用于环磷酰胺原料药。

供试品加入内标溶液后经流动相定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长195nm处检测环磷酰胺的峰面积，计算出其含量。

1. 乙腈

2. 乙醇

3. 对羟基苯甲酸乙酯

1.仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按环磷酰胺峰计算应不低于2000。

1.3 紫外吸收检测器

2.色谱条件

2.1 流动相：乙腈 水=36 65

2.2 检测波长：195nm

2.3 柱温：室温

1.内标溶液的制备

精密称取对羟基苯甲酸乙酯36mg，置200mL量瓶中，加乙醇2mL使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为内标溶液。

2.对照品溶液的制备

精密称取环磷酰胺对照品约25mg，置50mL量瓶中，加内标溶液5mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

3.供试品溶液的制备

精密称取供试品约25mg，置50mL量瓶中，加内标溶液5mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长195nm处测定环磷酰胺（C₇H₁₅Cl₂N₂O₂P)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，二部，p.308。