本方法采用薄层扫描法测定龟龄集中人参皂苷Rg₁的含量。

本方法适用于中成药龟龄集。

供试品经提取，过氧化铝大孔树脂柱，制成供试液，点样、展开，用薄层扫描仪进行双波长反射法锯齿扫描，λ_Ｓ=541nm，λ_Ｒ=700nm测量人参皂苷Rg₁吸收度积分值，计算其含量。

1.氯仿

2.甲醇

3.盐酸

4.硫酸

5.乙醇

6.人参皂苷Rg₁ (中国药品生物制品检定所)

1 仪器

1.1 薄层扫描仪

1.2 点样器

一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。

1.3 展开室

可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。

1.4吸附剂

硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。

2 色谱条件

2.1薄层板

硅胶G薄层板0.5% CMC-Na板，105℃活化30min。

2.2展开剂

氯仿＋甲醇＋水＝65＋35＋10，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，4.2.3 显色方式

喷以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑点显色清晰。

2.4 扫描条件

双波长反射法锯齿扫描，λ_Ｓ=541nm，λ_Ｒ= 700nm；灵敏度：中；狭缝：0.4mm×0.4mm；线性化参数：S_X=3。

1. 对照品溶液的制备

精密称取用五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷Rg₁对照品10mg，置10mL量瓶中，用少量甲醇溶解后，加甲醇至刻度(1mg/mL)，作为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取本品20粒，精密称定，倾出内容物，混匀，取约2 5g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚60mL，回流提取至近无色，弃去乙醚液，残渣挥干乙醚，加甲醇70mL，回流提取至近无色，回收甲醇至干，残渣用正丁醇饱和的水15mL溶解并移入分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次(15、15、15mL)，合并提取液，用1%氢氧化钠溶液洗涤3次(15、15、10mL)，再用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水层，回收正丁醇至干，残渣用70%乙醇适量溶解，移入已净化处理的氧化铝—D101型大孔树脂柱[内径1cm，D101型大孔树脂高7cm(下层)；100～120目中性氧化铝高3cm(上层)]上，再用70%乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，定量转移至2mL量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

1. 标准曲线的建立

精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘至斑点显色清晰。用薄层扫描仪依法进行扫描， 以浓度为横坐标，斑点面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程Y=773.3X 334.2，r=0.996；线性范围为1.03～6.18μg。

2.供试品含量测定

精密吸取供试品溶液10μL，对照品溶液2μL与4μL，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂硅胶G薄层板上，依法展开，显色，扫描测定，按外标二点法计算人参皂苷Rg₁的含量。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

精密吸取对照品溶液4μL，在同一薄层板上点样6次，依法展开，显色，扫描测定，结果RSD为1.8%。