方法名称: |
云南红豆杉枝叶—紫杉醇和三尖杉宁碱的含量测定—HPLC-UV |
应用范围: |
用于云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量测定 |
方法原理: |
本品粉末用乙酸乙酯:丙酮 (1∶1) 超声提取,浓缩,石油醚脱脂,过氧化铝柱后,经液相色谱仪分离,在227nm处测定,按外标法计算含量。 |
仪器设备及实验条件: |
仪器设备 Agilent1100高效液相色谱仪;G1314A紫外检测器。 | 色谱条件 色谱柱:Angilent Hypersil ODS2柱 (4.6mm×250mm×5μm);柱温:30 ℃;流动相:甲醇-乙腈-水 ( 20∶30∶50) ;流量:1.0ml/min;检测波长:227nm;进样量: 10μL。 |
试样制备: |
对照品溶液的制备 分别精密称取紫杉醇、 三尖杉宁碱对照品适量,各加甲醇制成每毫升约含 0.2 mg的溶液,作为对照品贮备液。 | 供试品溶液的制备 云南红豆杉枝叶自然干燥,粉碎,过60~80目筛,40℃减压干燥至恒重。称取药材约2.00g,精确称定,置磨口具塞三角瓶中,加入乙酸乙酯:丙酮 (1∶1) (30ml×2次 ),25℃ 超声振荡提取40min,滤过,上清液合并,减压蒸干,残渣加入蒸馏水10ml,石油醚 (60~90℃)萃取 ( 10ml×3次 ),石油醚层弃去,水液再用三氯甲烷萃取 (10ml×3次 ),合并各次三氯甲烷萃取液,用适量无水硫酸钠脱水后,减压蒸干,残渣加适量三氯甲烷溶解,加于氧化铝柱 (中性,4 g,内径 0.8 cm)上,用三氯甲烷洗去未被吸附的杂质,再用1%的 CH3OH∶CHCl 3 (V /V )淋洗,最后用5% CH3OH∶CHCl 3 50ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解,定容至1ml,甲醇液经 0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。 |
操作步骤: |
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,依上述色谱条件测定,按外标法计算含量。 |
附件: |
点击下载 (解压密码:www.lindalemus.com)
|
备注: |
|
参考文献: |
刘莉,罗佳波.云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的测定.时珍国医国药 .2006,17(5):754~755 |