方法名称: |
积雪草总苷元—羟基积雪草酸的含量测定—HPLC-DAD |
应用范围: |
用于50%积雪草总苷元中羟基积雪草酸含量的测定 |
方法原理: |
本品用甲醇溶解,经液相色谱仪分离,在204nm测定峰面积,按标准曲线法计算含量。 |
仪器设备及实验条件: |
仪器设备 美国Waters公司生产的高效液相色谱系统,配Waters 515型泵、996型二极管阵列检测器;Agilent1100型液质联用仪 (LC-MSD ) 。 | 色谱条件 色谱柱: Agilent Zorbax SB-C18柱( 150mm×4.6 mm,5 μm ) ;保护柱: Shimadzu Shim –packODS;流动相:甲醇-水(体积比为65∶35,含4mmol /L β-CD ,以乙酸调节pH值为4);流速0.4mL /min;检测波长:204nm;柱温:25℃;进样量:10μL。 |
试样制备: |
对照品溶液制备 精密称取羟基积雪草酸对照品 10.0 m g,用甲醇配制成10.0 g /L的溶液,然后用甲醇进行倍比稀释,配成质量浓度依次为 5.0,2.0,1.0, 0.5和 0.1g /L的羟基积雪草酸对照品甲醇溶液,以峰面积( y )对质量浓度 ( x,g /L )进行线性回归,羟基积雪草酸的回归方程为 y = 116.54x – 10.058, r2=019989。结果表明。样品量在 0.1~5.0 g /L范围内浓度与峰面积呈线性关系。 | 供试品溶液的制备 精密称取50%积雪草总苷元适量,置于10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,配制成50%积雪草总苷元甲醇溶液5.58 g /L 备用,。进样前用0.45μm 微孔滤膜过滤。 |
操作步骤: |
精密吸取供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以标准曲线法法计算羟基积雪草酸含量。 |
附件: |
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备注: |
采用在甲醇-水流动相中添加β-环糊精的方法分离了羟基积雪草酸和其同分异构体termi-nolic acid,并测定了50%积雪草总苷元中羟基积雪草酸的含量。 |
参考文献: |
潘见,开桂青,袁传勋.β-环糊精流动相添加剂法分离测定积雪草总苷元中的羟基积雪草酸. 色谱.2007,25(3):316~318 |