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荷叶—黄酮类物质含量的测定—HPLC-UV
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方法名称:
  荷叶—黄酮类物质含量的测定—HPLC-UV
应用范围:
  用于荷叶中黄酮类物质含量的测定
方法原理:
 本品经粉碎、提取、脱脂、分析,一部分再经脱鞣质,用乙醚直接提取,经高效液相色谱法分离,在370nm测定,按外标法计算测定游离黄酮甙元含量。
仪器设备及实验条件:
 

仪器设备  Waters 515高效液相色谱仪;Waters2487检测器。

色谱条件:色谱柱:Nova-pak C18柱 ;检测波长:370nm; 流动相: 甲醇∶水( 50∶50 ,V/V) ;流速:0.7ml/min ;柱温:室温.
试样制备:
 

对照品溶液的制备  准确吸取2.0mL标准储备液于25mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,摇匀, 浓度为8μg/mL。

供试品溶液的制备   选无损坏干荷叶、撕碎,在粉碎机中粉碎至60目,共需100g荷叶粉末将100g荷叶粉末置于锥形瓶中,加入约600mL95%乙醇(V总≈2V荷叶粉末),浸泡过夜, 将浸泡液在温度为60℃左右的水浴中回流提2h,冷却,倒出乙醇提取液,抽滤除渣,得墨绿色提取液780mL. 将墨绿色提取液分多次在旋转蒸发器中浓缩转移分液漏斗,加入100mL的蒸馏水,再加入60mL沸程为30~60℃的石油醚,充分摇匀后静置,分去石油醚层,用旋转蒸发器浓缩(水浴温度55 ℃,转速50r/ min),浓缩至少量时,往梨形瓶中加入少量无水乙醇,继续浓缩,直至蒸干,最后得一层橙黄色稠状的粗提物,往粗提取中加入97.5%的乙醇溶解,过滤,取滤液加入乙醇放入分液漏斗中,再加入乙醚萃取,分离乙醚层,蒸干,用甲醇溶解,备用。
操作步骤:
  分别吸取两种对照品溶液和两种供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,按拟定色谱条件测定,以外标法计算含量。
附件:
  点击下载 (解压密码:www.lindalemus.com)
备注:
 
参考文献:
  洪庆慈,汪海峰.荷叶中黄酮类物质含量的测定.郑州工程学院学报.2001.22.(2):50~54
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