方法名称: |
云南红豆杉枝叶—紫杉醇和三尖杉宁碱的测定—HPLC-UV |
应用范围: |
用于云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的测定 |
方法原理: |
本品细粉用乙酸乙酯-丙酮(1∶1)超声提取,经液相色谱仪分离,在227nm测定,外标法计算紫杉醇和三尖杉宁碱的含量 |
仪器设备及实验条件: |
仪器设备 Agilentl100高效液相色谱仪;G1314A紫外检测器。 色谱条件 色谱柱: Angilent Hypersil ODS柱 (4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-水( 20∶30∶50) ;柱温:30℃;流速:1. 0 ml/min;检测波长:227 nm;进样量:10μl。 |
试样制备: |
对照品溶液制备 分别精密称取紫杉醇、三尖杉宁碱对照品适量,各加甲醇制成每毫升约含0.0467mg的溶液,作为对照品液。 供试品溶液的制备 云南红豆杉枝叶自然干燥,粉碎,过60~80目筛,40℃减压干燥至恒重。称取药材约2. 00g,精确称定,置磨口具塞三角瓶中,加入乙酸乙酯:丙酮(1∶1) (30ml×2次),25℃超声振荡提取40 min,滤过,上清液合并,减压蒸干,残渣加入蒸馏水10ml,石油醚(60~90℃)萃取( 10ml×3次),石油醚层弃去,水液再用三氯甲烷萃取(10ml×3次),合并各次三氯甲烷萃取液,用适量无水硫酸钠脱水后,减压蒸干,残渣加适量三氯甲烷溶解,加于氧化铝柱(中性,4g,内径0.8cm)上,用三氯甲烷洗去未被吸附的杂质,再用1%的CH3OH∶CHCl3 (V /V )淋洗,最后用5% CH3OH∶CHCl3 50ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解,定容至1ml,甲醇液经0. 45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。 |
操作步骤: |
精密吸取对照液以及供试品溶液1Oμl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,计算含量。 |
附件: |
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备注: |
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参考文献: |
刘莉,罗佳波等. 云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的测定. 时珍国医国药.2006,17(5):754~755 |