方法名称: |
广西苦丁茶嫩叶和老叶中—槲皮素和山柰素的含量测定—HPLC |
应用范围: |
本方法适用于广西苦丁茶嫩叶和老叶中槲皮素和山柰素含量的测定 |
方法原理: |
本品剪碎加甲醇或70 %乙醇或水回流提取,经液相色谱分离,在360 nm处测定峰面积,外标法计算含量 |
仪器设备及实验条件: |
仪器 Waters液相色谱仪(Waters600泵,7725 i六通阀,996二极管阵列检测器,Millennium32 数据处理系统) 色谱条件 色谱柱:Waters公司N0va—Pak C18柱(3. 9 mm×300 mm,4μm) ;流动相:甲醇—0. 4 %磷酸溶液(50∶50);流速:0. 7 mL/min;检测波长:360 nm;柱温:40 ℃; |
试样制备: |
对照品溶液制备 精密称取槲皮素对照品8. 12 mg和山柰素对照品8. 34 mg分别置50 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度再稀释2. 5倍,即得对照品溶液。 供试品溶液制备 (1)用甲醇提取 将苦丁茶嫩叶和老叶分别剪碎后,称取样品20 g,加甲醇200 mL,水浴回流1. 5 h,过滤,残渣再加甲醇100 mL,回流1 h,合并滤液,用甲醇定容至250 mL量瓶中,得苦丁茶甲醇提取液。(2)用乙醇提取 称取已剪碎的苦丁茶叶20 g,加体积分数为70 %乙醇200 mL,水浴回流1. 5 h,过滤,残渣再加体积分数为70 %乙醇100 mL,回流1 h;合并滤液,用体积分数为70 %乙醇定容至250 mL量瓶中,得苦丁茶乙醇提取液。(3)用水提取 称取已剪碎的苦丁茶叶20 g,加200 mL的水煮提取1. 5 h,过滤,残渣再加水100 mL煮1 h;合并滤液浓缩至50 mL,再加体积分数为95 %乙醇140 mL搅匀使沉淀,静置24 h,抽滤,滤渣用体积分数为80 %乙醇洗涤,滤液合并置于250 mL量瓶中,用体积分数为80 %乙醇定容至刻度,摇匀,即得苦丁茶水提取液。 |
操作步骤: |
分别精密吸取槲皮素和山柰素对照液以及上述三种供试品溶液适量,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算槲皮素和山柰素含量。 |
附件: |
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备注: |
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参考文献: |
黄雪梅,蒙大平,荣延平. 广西苦丁茶嫩叶和老叶中槲皮素和山柰素的含量测定. 中国现代应用药学杂志. 2005,22(5):383~385 |