公开(公告)号
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CN1523113A
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公开(公告)日
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2004.08.25
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申请(专利)号
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CN03117329.2
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申请日期
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2003.02.20
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专利名称
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乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用
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主分类号
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C12N15/86
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分类号
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C12N15/86;C12N15/11;C12N5/10;A61K48/00
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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重庆医科大学
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发明(设计)人
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黄爱龙;唐霓;张秉强;阎歌
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地址
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400010重庆市渝中区医学院路1号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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重庆;85
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主权项
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构建三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体,其特征在于:本发明在构建针对HBV基因的siRNA表达载体时,根据siRNA的设计原则,分别选择HBV包膜蛋白(MS)编码区69nt-87nt,聚合酶(P)编码区708nt-726nt,核心蛋白(C)编码区2052nt-2070nt的核苷酸序列,设计相应的siRNA序列,用BLAST软件进行同源分析证实为HBV高度保守序列后,化学合成单链寡核苷酸,体外经退火形成双链DNA,与真核表达载体pTZU6+1连接,酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体。
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摘要
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乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用,本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原则,分别选择HBV包膜蛋白(MS)编码区69nt-87nt,聚合酶(P)编码区708nt-726nt,核心蛋白(C)编码区2052nt-2070nt的核苷酸序列,设计相应的siRNA序列,用BLAST软件进行同源分析证实为HBV高度保守序列后,化学合成单链寡核苷酸,体外经退火形成双链DNA,与真核表达载体pTZU6+1连接,酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体。上述表达载体通过阳离子脂质体介导与HBV真核表达载体pHBV共转染肝癌细胞HepG2后,采用免疫荧光和Abbott实验均证实HBV siRNA具有较强抑制病毒复制和表达的作用。
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国际公布
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