公开(公告)号
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CN1330665C
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公开(公告)日
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2007.08.08
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申请(专利)号
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CN200510112235.0
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申请日期
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2005.12.29
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专利名称
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海龙抗肿瘤活性蛋白
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主分类号
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C07K14/435(2006.01)I
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分类号
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C07K14/435(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)N
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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上海交通大学
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发明(设计)人
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李晓波;张朝晖;秦孙星;王 威;王梦月
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地址
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200240上海市闵行区东川路800号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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上海交达专利事务所
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代理人
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王锡麟;王桂忠
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国省代码
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上海;31
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主权项
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一种海龙抗肿瘤活性蛋白,其特征在于,以粗吻海龙为原料提取的分子量为55kDa的活性蛋白,其中,蛋白质含量在99-100%之间,糖含量在0-1%之间,通过以下方式获得: (1)以粗吻海龙为原料,粉碎后过筛,待用; (2)在粗吻海龙粗粉中加入4~12倍量的体积百分比为0~90%的乙醇-水溶液,匀浆、低温浸泡,离心后取上清液,即为海龙蛋白粗提液; (3)将蛋白粗提液于20~60℃减压蒸发浓缩后,与HZ-801大孔树脂接触,充分吸附后用蒸馏水洗脱,收集蛋白组分,得到海龙蛋白分离液; (4)将海龙蛋白分离液减压蒸发浓缩,加入硫酸铵粉末使硫酸铵浓度达到20%-90%饱和度,充分搅拌后4℃静置,离心,收集沉淀,将沉淀用少量Tris-HCl缓冲液溶解后透析、浓缩、冷冻干燥,即得到海龙粗蛋白; (5)将海龙粗蛋白用pH7.2、20mM Tris-HCl缓冲液溶解后,与凝胶过滤介质接触,用pH7.2、20mM Tris-HCl缓冲液洗脱,收集分子量在10-100kDa的蛋白质洗脱液,透析、浓缩、冷冻干燥后,经体外抗肿瘤活性检测,获得海龙抗肿瘤粗蛋白; (6)将海龙抗肿瘤粗蛋白用pH8.4、20mM Tris-HCl缓冲液溶解,与离子交换介质接触,梯度NaCl缓冲液洗脱,得到数个不同浓度NaCl缓冲液的洗脱组分,0.5M NaCl洗脱峰经透析、浓缩、冻干后即为所述的海龙抗肿瘤活性蛋白。
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摘要
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一种医药技术领域的海龙抗肿瘤活性蛋白,以粗吻海龙为原料提取的分子量为55kDa的活性蛋白,其中,蛋白质含量在99-100%之间,糖含量在0-1%之间,其外观为白色粉末,SDS-PAGE显示是单一条带。本发明所提供的海龙抗肿瘤活性蛋白,具有抗肿瘤活性,同时有低毒、增强免疫的特点。本发明单独或与其它药物联合使用均有抗肿瘤作用,主要用于各种癌症的治疗和辅助治疗,如:肺癌、肝癌、宫颈癌、结肠癌、白血病等,尤其对A-549、Bel-7402、Hela、Lovo、P-388细胞株有较强杀伤作用;同时还具有增强免疫的作用。
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国际公布
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