公开(公告)号
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CN101144080A
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公开(公告)日
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2008.03.19
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申请(专利)号
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CN200710129894.4
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申请日期
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2007.08.01
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专利名称
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重组人VIP-Humanin融合蛋白制备方法
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主分类号
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C12N15/09(2006.01)I
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分类号
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C12N15/09(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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北京化工大学
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发明(设计)人
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陈劲春;常 婧
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地址
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100029北京市朝阳区北三环东路15号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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北京;11
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主权项
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一种重组人VIP-HN融合蛋白的制备方法,其特征在于,采用基因工程菌发酵法生产,而不是从天然存在的生物材料中制备。
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摘要
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发明专利名称:重组人VIP-Humanin融合蛋白制备方法 技术领域:本发明涉及生物工程、食品工程、保健品领域。本发明采用DNA重组技术,根据大肠杆菌偏爰密码,设计、合成了串联共表达人VIP-Humanin融合蛋白的编码基因并由BamHI和SaCI定向克隆进pET28a(+);筛出阳性克隆之后,挑取一个单菌落对其发酵条件和产物分离纯化工艺进行优化处理。发酵3h左右OD600达到0.6~0.7时,加入诱导剂至终浓度1mmol/mL,诱导表达4h目标蛋白合成达到高峰,粗蛋白采用Ni-螯合亲和层析进行初分,DEAE-sepherose离子交换柱纯化,经重组肠激酶酶切纯化后获得rhVIP-Humanin融合蛋白。采用Tricine-SDS-PAGE,RP-HPLC和MALDI-TOF-TOF-MS等表征确认所制备的蛋白是rhVIP-Humanin。它将用于防治老年痴呆症。
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国际公布
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